Bone DNA Extraction Technique

Bone deoksyribonukleinsyre (DNA) ekstraksjonsteknikker har en lignende protokoll for å vev og celle DNA-ekstraksjon, som typisk krever lysering av prøvene. Fordi ben besitter en mer ugjennomtrengelig overflate, men de fleste ekstraksjonsmetoder krever pulverisering. Alternativt, hvis pulverisering er ikke et mulig eller foretrukket fremgangsmåte, nye bioteknologi har rør som bruker trykk for å ekstrahere DNA fra små beinfragmenter.

sterilisering

Som en begynnelse trinn til en hvilken som helst type DNA-ekstraksjon, må steriliseringen gjøres for å minimalisere kryss-kontaminering. Overflate områder av beinprøver bør behandles først med blekemiddel og destillert vann. I tillegg bør alle instrumenter og verktøy skal steriliseres i en høy varme autoklav. For større instrumenter (dvs. knusere) som ikke kan autoklaveres, bør brukes blekemiddel og alkohol å rengjøre overflater som prøven kan komme i kontakt. I tillegg bør pipettering og håndtering av prøver gjøres i en godt ventilert hette pleksiglass.

pulverisering Method

Når beinprøver har blitt vasket med blekemiddel og destillert vann, bør de utvendige flater slipes ned med en liten disk instrument. Denne prosessen vil fjerne fremmed DNA forurensning og avsløre noen myk benvev nødvendig for utvinning. Bein Prøvene kan deretter males til et fint pulver for ekstraksjon. For ca 750 mg av bein pulver, er nødvendig 1,6 ml av fordøye buffer. I henhold til en metode som er publisert i "Nucleic Acids Research", fordøye buffer bør bestå av .1M EDTA, en saltoppløsning, og proteinase K. Denne spaltningen skal plasseres over natten ved 37 ° C for å muliggjøre optimal fordøyelse av benvevet for DNA-ekstraksjon .

Etter over natten fordøyelse, bør prøvene sentrifugeres ved høy hastighet i 15 til 30 minutter for å tillate at all unødvendig materiale til pellet. Supernatanten ble deretter fjernet og tilsatt til en ammonium-acetat, salt og ren etanol-løsning for utfelling. Dette preparatet gjøres enklest i merkede Eppendorf-rør, og deretter plassert i tørris for optimal utfelling. Rørene kan så sentrifugeres etter ca. en times inkubasjon i tørris. Etter at bunnfallet dannes, fjern supernatanten (nøye kontroll for en pellet) og oppløse pelleten i 20 til 50 mikroliter av sterilisert avionisert vann.

Non-pulverisert Method

Et bioteknologiselskap som heter Trykk biovitenskap Inc. opprettet en ny metode for bein DNA-ekstraksjon som krever ingen pulverisering. Metoden bruker press sykling teknologi (PCT) å trekke ut DNA. Denne teknologien er hevdet å eliminere kryssforurensning som ofte oppstår ved bruk av en knuser. I likhet med det pulveriserte metoden er imidlertid beinprøver likevel må steriliseres i blekemiddel og destillert vann før fremstillingen og hamret inn i mindre fragmenter med omtrent 250 mg for å passe inn i settets vakuumslanger.