De Metoder for HLA Typing

Det store histokompatibilitetskompleks, MHC, eller omfatter en gruppe av gener som koder for proteiner som er tilstede fragmenter av proteiner på celleoverflaten for gjenkjennelse hos hvite blodlegemer. Hos mennesker er MHC kalles HLA, eller human leukocytt antigen. Immunsystemet bruker HLA proteiner for å skille "selv" fra "nonself" - sine egne celler fra inntrengere ". Ved utføring av fremgangsmåter som for eksempel benmargstransplantasjon, kan forskjellene i HLAs mellom to individer føre til problemer som transplantat-versus-vert-sykdom, hvor T-celler fra en donor angrepet pasientens egne celler. Skrive spesifikke HLA-gener i donor og sammenligne dem med bestemte HLA gener i mottakeren kan bidra til å sikre en god kamp.

Serotypebestemmelse

Serotyping metoder bruker antistoffer til å skille mellom ulike varianter av et gitt HLA protein. Hvert antistoff er meget spesifikt for et gitt molekyl. Ved å bruke forskjellige antistoffer, kan forskerne dele HLAs inn i ulike "serotyper" og finne ut om pasient- og donor serotyper for visse HLAs er en god match. Denne metoden er nå i stor grad erstattet av nye DNA-baserte metoder som er mer nøyaktig og ofte lettere å gjennomføre.

PCR

En strategi for HLA-typing er avhengig av en felles molekylærbiologisk teknikk som kalles PCR eller polymerase kjedereaksjon. I utgangspunktet PCR gjør mange kopier av en strekning av DNA; regionen som er kopiert eller "forsterket" er spesifisert av to korte stykker av DNA kalt primere. For å gjøre HLA typing, kan lab teknikere bruke primere som kun vil fungere for enkelte versjoner av en gitt HLA-genet, men ikke andre. Ved å kjøre PCR-reaksjonen med visse primere kan teknikere bestemme hvilke varianter er til stede i pasienten, og den prospektive donor.

Southern Blotting

Et annet DNA-baserte fremgangsmåten er svært lik en molekylærbiologisk teknikk som kalles Southern blotting. Først blir PCR anvendes for å amplifisere spesifikke HLA-gener. Deretter blir produktene av PCR-reaksjonen skilles ut etter størrelse og overført til en membran. Membranen ble behandlet med et lite stykke av DNA som kalles en sonde; denne probe er merket med en radioaktiv isotop eller "radioaktivt merket." Sonden vil bare bindes til DNA på membranen dersom et treff (for eksempel komplementære) sekvens er tilstede. Ved å teste membranen med forskjellige DNA-prober, teknikeren kan avgjøre hvilken varianter av en gitt HLA gen som er til stede.

Gene Sekvense

Den mest nøyaktige og nøyaktig metode for HLA-typing er direkte sekvensering av HLA-gener fra både donor og pasient og sammenligne sekvensene. Historisk dette ville ha vært umulig gitt de høye kostnadene og tekniske utfordringene som er involvert; i de senere år har imidlertid kostnadene falt dramatisk, og for noen laboratorier gensekvensering kan nå være et levedyktig alternativ. Dens hovedfordel ligger i dens evne til å skille alle forskjellige varianter av et gitt HLA gen.