DNA-testing av metoder

DNA-testing er prosessen med å bruke DNA for å hjelpe til med identifisering av individer. Mens 99,9 prosent av humane DNA-sekvenser er de samme forskere er i stand til å bruke repeterte sekvenser i DNA for å skille mellom individer fra hverandre, ettersom denne informasjon alltid er forskjellig. DNA-testing er også kjent som DNA profilering, DNA-typing eller genetisk fingerprinting og kan brukes til å knytte mistenkte forbrytelser, etablere farskap eller fødselspermisjon, bevise blod forhold eller bestemme genealogiske røtter.

test Bakgrunn

Den grunnleggende nøkkel for DNA-testing er i å finne forskjeller i spesifikke DNA-sekvenser. To sett med DNA er nødvendig for sammenligning. I dataanalyse, for eksempel, disse er ofte DNA-prøver fra åstedet sammenlignet med DNA fra en mistenkt. Det første trinnet i testing kan variere avhengig av forskjellige teknikker (beskrevet i avsnittene nedenfor), men er i utgangspunktet isolering av en del av en DNA-sekvens. De kuttet DNA-fragmenter blir deretter sortert etter størrelse ved hjelp gel elektroforese. En blot av gelen er laget for å ta opp den gel resultater og en sonde slippes ut på det blot for å finne og binde til et tilsvarende DNA-sekvens som den som er forbundet med sonden.

Rflp

Rflp (RFLP) er en teknikk for DNA isolering som ofte brukes i etterforskning. Vanligvis krever RFLP store mengder nedbrutt DNA, så det er ideelt for åsteder som er nye med mye bevis. Så snart tilstrekkelige prøver blir oppnådd, blir restriksjonsenzymer anvendes på DNA for å isolere en sekvens kjent som AATT. Fragmentene blir deretter kjørt gjennom en gel-elektroforese, gjort til en blot og probet (som nevnt ovenfor). Størrelsen på DNA-fragmentene ble funnet ved sonden blir analysert, og resultatene av hver prøve av DNA sammenlignes. En kamp kan bli erklært hvis bandene er alle innen fem prosent av hverandre i størrelse.

Polymerase kjedereaksjon

Polymerase kjedereaksjon (PCR) er en annen teknikk for DNA-amplifikasjon vanligvis brukes i dataanalyse. I motsetning RFLP, har PCR evnen til å bruke informasjon fra svært små og selv degraderte prøver med sterkt forsterke bestemte regioner av DNA. PCR anvender to korte stykker av DNA kjent som oligonukleotidprimere og en termostabil DNA-polymerase for å isolere den delen av DNA som skal kopieres. Prøvene av isolerte DNA blir så kjørt under gelelektroforese og blottet på samme måte som med RFLP for analyse og sammenligning. Det bør legges merke til at forurensning av DNA-prøven er av særlig betydning i PCR-analyse. Hvis en hvilken som helst form for andre DNA fra enten andre personer eller gjenstander som for eksempel bakterier er tilstede, kan mange kopier av isolerte DNA-fragmenter som fremstilles fra feil kilde og gi falske resultater.

Viktigheten av Short Tandem Gjentar

Korte tandem repetisjoner (STR) er små regioner i korte gjentatte sekvenser i DNA som varierer sterkt mellom ubeslektede individer. Bare 5 til 20 prosent av individer deler de samme gjentatte sekvenser, slik at identifikasjonen av denne regionen er meget nyttig for å identifisere individer. Jo flere områder som er isolert og testet, vil mer nøyaktige resultatet bli. STR er ofte isolert ved hjelp av PCR på grunn av PCR er forsterkereffekter.

AmpFLP

Amplifiserte fragment lengde polymorfisme (AmpFLP) er en teknikk som er avhengig av variable antall tandemrepetisjoner (VNTR) for å skille alleler, som er forskjellige former av et gen. PCR anvendes for å amplifisere DNA-prøver som deretter kjøres på en polyakrylamidgel for å separere alleler i stedet for av størrelse som andre tester gjør. Denne spesielle testen er svært automatisert og lave kostnader, så det er ganske populært i lavere inntektsland.

multiplex STR

Mutliplex STR er en vanlig forekommende STR test som utnytter flere PCR i en reaksjon for å teste ulike fragmenter på samme tid. Denne form for testing er utformet for å isolere STR med forskjellige størrelser fra STR med overlappende størrelser ved å anvende forskjellige fargestoffer for å skille dem fra hverandre. Testen benytter også kapillærrør og electroferograms i stedet for gelelektroforese for å skille DNA-fragmentene. Fordelen med denne typen testing er de raske resultater i forhold til andre typer testing. Imidlertid er multipleks STR ganske ny, og kan være gjenstand for overinterpretation når partielle profiler brukes.