Forskjellen mellom Nord og Sør Blotting

Biologi er en utfordring for mange grunner. En av disse grunner er vanskeligheten i å studere makromolekyler --- molekyler som inneholder hundrevis eller tusenvis av mindre molekyl enheter satt sammen. Hvis bare ett eller to av de mindre molekylære enheter er byttet ut, makromolekyler endre deres egenskaper. Biologer må liksom måle svært små endringer i et meget stort molekyl. Of course, "stor" betyr ikke stor nok til å håndtere eller se, så biologer trenger spesialverktøy for å gjøre slike målinger. Blotting er en av disse verktøyene.

gel elektroforese

Alle blotting teknikker begynne med gelelektroforese. Gelen er mer eller mindre som en tynn remse av gelatin. En liten mengde av en spesielt fremstilt biologiske molekyler er satt på gelen ved den ene ende, så et elektrisk felt påtrykkes fra den ene enden til den andre. De fremstilte molekyler er elektrisk ladet, slik at det elektriske felt trekker dem gjennom gelen. De beveger seg langsomt gjennom den tykke gelen inntil feltet er slått av. De lettere molekyler få hevet raskere og gå videre, de tyngre molekylene tar lengre tid å bevege seg slik at de ikke gjør det så langt.

Bruke Gels

I praksis blir en rekke forskjellige prøver å sette ned spre seg ut langs den ene kanten av gelen. Etter at det elektriske felt påtrykkes, på de forskjellige prøvene spredd ut på vei mot den motsatte kanten av gelen. Spredningen av hver prøve kalles en "lane". Den kjørefelt vil vanligvis ha et par forskjellige bånd tilsvarende molekyler av forskjellige vekter innenfor hver prøve. Det finnes flere forskjellige måter å lage band synlig. Analysere gel gir biologer et inntrykk av størrelsen på de ulike molekyler, men for å få mer informasjon, trengs en annen metode. Det er der blotting kommer inn.

Blotting

Blotting er en måte å ta molekylene som har blitt spredt fra hverandre i gel og gjøre dem tilgjengelige for mer analyse. På samme måte trekkpapir soaks opp løs blekk --- eller gjorde i de dager da folk brukte fyllepenner --- biologisk blotting "soaks opp" molekylene fra gelen inn i et annet materiale. Molekylene ender opp i det samme mønster, men nå i et spesielt papir eller plastfolie. Molekylene blir bundet til arket slik at de ikke beveger seg lenger, og da kan de bli dynket i en løsning av andre probe molekyler som gir mer informasjon om molekyler. Det finnes flere ulike måter å gjøre disse trinnene, men prinsippet er det samme for alle av dem.

Sør, Nord og Western blotting

Biolog Edwin Southern var den første til å utvikle en blotting teknikk. Han utviklet alle detaljer som trengs for å være sikre på at DNA gel elektroforese kan bli nøyaktig overført og målt i blotting materiale. Denne metoden ble oppkalt etter ham: Southern Blotting. Andre forskere funnet ut hvordan å gjøre det samme generelle teknikken arbeid for RNA, og --- i typisk morsom vitenskapsmann stil --- kalt deres detaljert metode Northern blotting. Senere ble fremgangsmåten modifisert for måling av proteiner, og ble kalt Western blotting. Alle tre teknikkene bruke de samme prinsippene: Southern måler DNA, Northern tiltak RNA, vestlige måler proteiner.