Gel elektroforese Lab Prosedyrer

Gel elektroforese er en metode som brukes i laboratorier for å måle og sortere DNA-tråder. Det er nødvendig fordi DNA under normale forhold er for liten til å manipulere, selv når vises ved hjelp av de fleste mikroskoper. Gel elektroforese er en relativt enkel fremgangsmåte, og det samme grunnleggende teknikk kan anvendes for å separere individuelle proteiner, så vel.

Gel Matrix

Til å begynne gel elektroforese, må du først opprette gel. Typisk blir gelene laget i tynne lag ved hjelp av en substans som kalles agarose. Pulverisert agarose er plassert i en kolbe, etterfulgt av en saltvannsoppløsning som kalles en buffer. Denne blanding av agarose og buffer oppvarmes inntil de to stoffene smelter sammen, deretter helt inn i en formingsformen. En enhet som kalles en kam blir deretter plassert i den ene ende av formen før gelen avkjøles. Når gelen er avkjølt, blir kammen fjernet, og etterlater små slisser som vil bli brukt for å holde DNA-prøver.

En spesiell egenskap ved den avkjølte blandingen agarose (kalt en gelmatriks) stammer fra det faktum at det er skapt med saltvann. Når elektrifisert, vil matrisen bli ledende, slik at strøm til å flyte langs dens lengde. En annen spesiell egenskap ved gel-matrisen er tilstedeværelsen av regelmessige, mikroskopiske hull. Disse hullene vil tillate DNA-strenger å reise gjennom gel matrix og lette sorteringsprosess.

Den Elektroforese Chamber

Det neste trinnet er å opprette en elektroforese kammer. Dette er en liten rektangulær boks, koblet med en positiv og negativ elektrisk kobling ved hver ende. Chambers er vanligvis grunne, små nok til å passe på et bord, og bygget fra klare materialer som pleksiglass.

Saltvann Oppløsningen helles i bunnen av elektroforese kammeret, og gelmatriksen er neddykket noe innenfor denne løsningen. Saltvann tjener to formål: skal hjelpe flyten av elektrisitet og holde gel matrix fuktig. Siden DNA er drevet av en negativ ladning, plasserer matrise slik at prøvene vil bli plassert ved siden av negativ elektrisk tilkobling.

Klar DNA

DNA-prøver ble deretter fremstilt. Siden DNA i oppløsning er nesten umulig å se, et fargemiddel som kalles en ladningsbuffer ble tilsatt til hver enkelt prøve. Denne agenten tykner også DNA-løsning, noe som gjør det mindre rennende og mer gjennomførbar. Ved hjelp av en pipette, overføres en prøve av DNA-oppløsningen i hvert alternerende spor i gelmatriks. I det tomme sporet mellom hver prøve, plassere noen løsning av DNA som har lengde du allerede vet (kalt DNA standard) for eksperiment kontroll og sammenligning.

Slå på strømmen

Nå slår på elektroforese kammeret. Under negativ strøm, vil DNA-prøver bli tvunget på tvers av lengden av kammeret. Små DNA-tråder vil bevege seg raskere gjennom gelen matrise, og i løpet av kort tid vil de skille seg fra lengre, tregere tråder. Fargestoffet i fargestoffet kan du følge sporet av DNA. Du vil ikke være i stand til å se individuelle tråder av DNA, men tråder av samme lengde vil klumpe seg sammen.

endelige Steps

Når DNA blir sortert ut, blir matrisen fjernet fra elektroforese kammeret. DNA blir deretter farget for å tillate enklere måling og undersøkelse.