Gelelektroforese Verktøy

Den gel-elektroforese apparat består av flere komponenter, som hver er nøkkelen til den prosess som vil oppstå når man kjører DNA-fragmenter eller proteiner på gel. Forstå hvordan disse komponentene fungerer og samhandler vil gi deg en bedre forståelse av hvordan gelelektroforese fungerer - og hvordan du kan tolke resultatene.

Farging og visualisering

Gels er vanligvis farget med en kjemisk kalt etidiumbromid, som kan bli innsatt mellom de to tråder i et dobbelttrådet DNA-fragment. Den fluorescerer sterkt når det er bundet til DNA, så utsette gelen til ultrafiolett lys vil gjøre bånd av DNA-fragmentene klart synlig. UV-lys er skadelig for det menneskelige øye, selvfølgelig, så gelen er vanligvis undersøkt i en ultrafiolett lysbord kalt en transilluminator. UV-belyste gelen også typisk fotografert slik at resultatene kan analyseres senere.

gel

Gelen anvendes for elektroforese av DNA-fragmenter er laget av agarose, et stivelseslignende polymer som finnes i sjøtang. Fremstilling av gelen er bare et spørsmål om å blande agarose pulver med en buffer kjemisk og oppvarme den i en mikrobølgeovn; gelen kan så helles og fikk avkjøles. Proteiner blir vanligvis separert på en polyakrylamidgel; denne gel fremstilles fra en monomer kalt akrylamid. Tilsetning av ammoniumpersulfat og tetrametylendiamin (eller TEMED) til akrylamid blandingen bevirker at akrylamid for å polymerisere og herde. Akrylamid er en nervegift, slik at disse gels - som alle laboratoriekjemikalier - aldri bør håndteres uten hansker.

Tank

Tanken er laget av plast; den inneholder en gel seng (eller gel avstøpning skuffen) som gelen vil ligge. På hver side er to plastplatene som holder gelen på plass mens det er kjøling. Når gelen har stivnet, er han tank fylt med buffer slik at nivået av buffer ligger rett ovenfor gel; lokket på elektroforese kammer inneholder elektrodene som leverer strøm fra strømkilden, som opprettholder en fast spenning. Når strømmen er slått på, vil de negativt ladede DNA-fragmenter begynner å vandre mot den positive elektroden (anoden). Gelelektroforese med proteiner som er lik, men gelen drives vertikalt.

Kam & Mikropipette

Når strømme gelen, er en plast kam brukes til å lage små kvadratiske fordypninger - kalt brønner - i gelen. DNA-prøvene vil senere bli lastet inn i disse brønnene ved anvendelse av en mikropipette. Som større pipetter, er en mikropipette konstruert for å ta opp og avgi en nøyaktig kalibrert volum av væske. Mikropipetter er vanligvis justerbar slik at brukeren kan bestemme hvor mange mikroliter de ønsker å legge til. Oppløsningen inneholdt i plast mikropipette spissen, som vanligvis brukes bare én gang før de kastes for å unngå forurensning.