HPLC-kolonne Hint

Kolonnen er hjertet av en hvilken som helst væskekromatografi (HPLC) system. Selv om det er litt mer enn en hul metallsylinder fylt med et porøst fast pakning, er den kolonne ansvarlig for effektivt å separere kjemiske komponenter i en blanding, slik at de kan tilpasses individuelt identifisert og kvantifisert. Det er flere triks av handelen som kan bidra til å holde kolonne opererer på topp ytelse for så lenge som mulig.

Solvent Match

I HPLC, er et løsningsmiddel kjent som "mobile fase" pumpes gjennom det indre av kolonnen. Kjemikalier som er oppløst i dette oppløsningsmiddel er adskilt når de passerer gjennom det porøse faste stoff innsiden. Sørge for at oppløsningsmidlet man bruker som den mobile fase med en bestemt kolonne er egnet for bruk med paknings inne i kolonnen. For en "normal fase" kolonne pakket med silikagel, er ikke-polare løsningsmidler slik som heksan som vanligvis brukes. For "omvendt fase" kolonner med ikke-polare pakninger, polare løsemidler, inkludert vann og metanol, er ønskelig.

pH og buffere

De fleste kolonnene vil ha en grense for pH-området av den mobile fase de kan tåle. Ved hjelp av et oppløsningsmiddel som er overlegg surt eller alkalisk altfor kan dårlig skade og nedbryter kolonnepakning. Sikre at pH til den mobile fasen er innenfor produsentens anbefalte området. Bruken av bufrede løsemidler (som inneholder oppløste kjemikalier) bør utøves med forsiktighet også. Pass på at du skyller ut noen buffer fra en kolonne før lagring, for eksempel for å hindre at de oppløste kjemikalier utløsende ut over tid og tilstopping kolonnen.

Retning

Mange kolonner kommer merket med en spesifikk retning som den mobile fase skal flyte gjennom kolonnen. Dette kan virke litt merkelig, ettersom søylene er mer eller mindre symmetrisk fra ende til ende, men det er normalt på grunn av plasseringen av en fritte (en metallfilteret) i en eller begge ender av kolonnen, enten like etter kolonnen innløp , eller like før avkjøringen. Innløpet filter er ment til å fange partikler som ellers ville tilstoppe kolonnen og er noen ganger kan skiftes ut. Reversering kolonnen posisjonerer ikke-utskiftbart frit på forsiden, noe som betyr at det kan være vanskeligere å fikse en tett kolonne.

Guard kolonne

Ofte kolonne forhandlere selger også det som er kjent som "vakt kolonner." Vakt kolonnene er i utgangspunktet billig, miniatyr av vanlige kolonner og er plassert i løsningsmiddelstrømningsbane like før den virkelige kolonnen. Hvis en skadelig kjemisk blir injisert på HPLC som kan, for eksempel, bindes til kolonne pakking i og tette den, vil det bli fanget opp av beskyttelseskolonne. Bruk av vakt kolonner i stor grad kan forlenge livet til en kolonne.

andre tips

Unngå å utsette kolonner til overdrevent varme eller kalde temperaturer, noe som kan redusere emballasjen. Også unngå ekstreme trykk på grunn av høye strømningshastigheter mobile. Disse trykkene kan komprimere pakningen for å skape hulrom inne i kolonnen og gjøre det ineffektivt. Tilsvarende starter den mobile fasestrømmen ved en lav hastighet og deretter rampe opp til den aktuelle ønskede strømningshastighet, for å unngå trykksjokk i kolonnen. Pass på at du filtrere alle løsemidler og prøver før de passerer gjennom kolonnen for å unngå partikler som helt eller delvis kan plugge kolonne strømningsbaner de.