Hva er sammenhengen mellom Korrigert optisk tetthet og celle nummer?

Hva er sammenhengen mellom Korrigert optisk tetthet og celle nummer?


Optisk tetthet - et mål på i hvilken grad et stoff overfører lys - blir ofte brukt til å måle konsentrasjonen av celler eller partikler som er dispergert, men ikke oppløst i en væske. Den korrigerte optiske tetthet av denne type blanding, kjent som en suspensjon, er direkte proporsjonal med konsentrasjonen, densitet eller antall celler dispergert i den.

Beer-Lambert Law

Den Beer-Lamberts lov, som sier at absorbans er proporsjonal med eller har et lineært forhold til konsentrasjonen av den absorberende art, er bare sant for optiske densiteter under 0,4. Imidlertid kan prøver med optiske densiteter høyere enn 0,4 fortynnes med en definert fortynningsfaktor og deres optiske densiteter målt. Dersom de målte verdier er delt med fortynningsfaktoren, for å frembringe den korrigerte optiske tetthet, er denne nye verdi proporsjonal med antall celler i prøven.

spektrofotometer

Optisk tetthet måles ved hjelp av et instrument, som er kjent som et spektrofotometer, som sammenligner lysstyrken av lyset som sendes ut fra to kilder, hvorav den ene har visse standard-karakteristikker. Som lyset passerer gjennom en cellesuspensjon, blir lyset spredt av cellene slik at mindre av den når en fotoelektrisk celle - en elektronisk innretning, hvis elektriske utgang varierer med styrken av det lys som faller på det - inne i spektrofotometer. Således, jo høyere antallet celler i suspensjonen svakere den elektriske utgangen fra den fotoelektriske celle, og vice versa.

Optical Density Rettelse

Ved optiske densiteter over 0,4, den grad til hvilken cellene kan bli skygget av andre celler eller reflekterer lys mange ganger er merkbar. Ved høyere optiske tettheter, er det ukorrigerte optiske tetthet av cellesuspensjoner ikke lenger er direkte proporsjonal med celletallet. Imidlertid er ukorrigerte optiske tettheten av fortynnet cellesuspensjoner nesten proporsjonalt med deres nøyaktige kjente relative tettheter - forholdet mellom deres tettheter som i en referansestoff, såsom vann - slik at det er en rimelig arbeids antagelse at den ukorrigerte optiske tetthet av en sterkt fortynnet cellesuspensjon er faktisk dens sanne optisk tetthet.

Relativ optisk tetthet

Ved å multiplisere den relative tetthet verdien av en hvilken som helst cellesuspensjon av den grunnleggende optisk tetthetsverdi oppnås fra den sterkt fortynnede cellesuspensjonen, er det mulig å oppnå den korrigerte optisk tetthet. Men for å gjøre målingen så nøyaktig som mulig, bør den grunnleggende optisk tetthet verdi hentes fra flere spektrofotometrisk målinger.