Hvilke funksjoner av agarosegel i elektroforese?

Agarosegelelektroforese er en laboratorieteknikk ved hvilke proteiner er adskilt fra hverandre på basis av størrelse. En prøve av blandet proteiner, ofte segmenter av DNA eller beslektede molekyler, er plassert ved den ene ende av et ark av agarosegel. Elektrisitet blir så tilført til gelen og de negativt ladede nukleinsyrer i proteinene blir tiltrukket av den positive ladningen ved den annen ende av gelen med mindre proteiner som beveger seg lengre enn større seg, som danner en serie av bånd av hvert protein størrelse.

Underlag

Agarosegel er et polysakkarid som danner en gelatinaktig matrise. Gelen gir et substrat som kan DNA separasjon forekomme. Større DNA-fragmenter ta lengre tid å migrere gjennom maskene av matrisen. Dette fenomenet letter separasjonen av molekyler etter størrelse.

oppløsning

DNA varierer i størrelse fra noen få basepar opptil flere millioner basepar kan skilles ved hjelp av agarosegel-elektroforese. Konsentrasjonen av agarose som brukes for å gjøre gelen bestemmer klarheten av oppløsningen av proteinpartikler. Mindre DNA-molekyler er mer tydelig løses når en høyere konsentrasjon av agarose-gel benyttes ved kjøring av prøven.

buffer Absorpsjon

For å kunne anvende en elektrisk ladning til DNA-prøven, må agarosegelen være mettet med en salt-inneholdende bufferløsningen. To populære bufferløsninger er TAE (Tris-acetat-EDTA) og TBE (Tris-borat-EDTA). Buffere må legges ved en nøyaktig konsentrasjon; en altfor fortynnet buffer vil hemme bevegelse av proteinpartikler og en altfor konsentrert buffer kan bli overopphetet når strømmen er brukt og overskuddsvarmen kan smelte gel eller skade proteiner.

Dye Contrast Bakgrunn

Fluorescerende fargestoffer slik som etidiumbromid kan tilsettes til en prøve for å visualisere de separerte DNA-proteinene når elektroforese er fullført. Dette fargestoff bindinger til mellomrommene mellom nukleinsyrene DNA. Agarosegelen gir en visuell kontrast til de fargestoffer, slik at plasseringen av hvert bånd av protein kan tydelig skjelnes.

Henvisning

En referanseprøve av proteiner av kjent størrelse, referert til som en "stige", blir ofte løpe parallelt med prøven gjelder. Ettersom alle proteiner av samme størrelse og form bevegelse med samme hastighet i den samme konsentrasjon av agarose-gel, kan plasseringen av stige proteiner i forhold til prøven anvendes for å bestemme størrelsen på proteinene i spørsmålet.

protein Capture

Etter at proteinene har blitt separert, holder agarosegel dem på plass når strømmen er slått av. Hvert bånd av proteiner kan deretter individuelt fjernes fra gelen og behandlet for videre testing eller eksperimentering.