Hvordan å optimalisere en Shake Flask Culture

Prosessen med å optimalisere dyrkningsmedium ved hjelp av rystekolbe-kultur er forholdsvis enkel. De spesifikke forhold og faktorer vil variere avhengig av studie organisme og forskning mål, noe som resulterer i et behov for studier spesifikke optimalisering. For eksempel kan de medier og betingelser som er nødvendig for å dyrke en bakterie vise seg å være mindre enn optimal for en annen bakterie eller en gjær. Du kan bruke disse grunnleggende retningslinjer for å lage en plan for å optimalisere dyrkingsmedium for en bestemt molekylærbiologi studie.

Bruksanvisning

Optimalisere Kultur Medium

1 Identifisere en passende dyrkingsmedium for å optimalisere og velge test faktorer som kan påvirke veksten av testorganismen. For eksempel, kan du vurdere å endre beløp eller type sukker i en medium, eller pH i mediet.

2 Velg testnivåer for hver faktor som skal testes. For eksempel, kan du vurdere å teste sukker beløp på det anbefalte nivået, det dobbelte av anbefalt nivå, og halvparten av det anbefalte nivået.

3 Forbered og autoklav 150 ml dyrkingsmedium for hvert nivå av hver faktor som skal testes. For eksempel, forberede og autoklaveres 150 ml hver av halv sukker, normal-sukker og dobbelt sukker dyrkingsmedium.

4 Etikett Erlenmeyer-kolber med tape og permanent markør for å fremstille tre kolber for hvert nivå av hver faktor som skal testes.

5 Tilsett 50 ml av det passende kulturmedium til hver kolbe (tre kolber pr nivå per faktor), inokulering med studien organismen og plasserer flaskene for rysteinkubator. Tillat inkuberes i 7 dager.

6 Måle veksten av studien organismen i hver kolbe i henhold til studieprotokoll for den organismen. For eksempel kan du filtrere, skylle, tørke og deretter veie bakterier som dyrkes i hver kolbe.

7 Beregn gjennomsnittlig vekst for hvert nivå av hver test faktor ved å midle vekten av studien organismene mellom de tre kolbene.

8 Lag et linjediagram av resultatene dine med studien organisme vekst på y-aksen og nivåene av hver test faktor på x-aksen. Bruk disse grafene til å velge optimale nivåer av hver medium komponent testes.

Hint

• Vurder å bruke testsett for å teste sukker og pH-verdier under optimaliserings forsøket.
• I stedet for en enkelt faktor tilnærming til optimalisering, vurdere å bruke en multippel ortogonal metode for å evaluere flere faktorer samtidig.
• Sørg for å bruke egnet personlig verneutstyr til alle tider!