Hvordan beregne molariteten av proteiner

Når rense proteiner, må du være kunne beregne konsentrasjonen. Det finnes en rekke måter å gjøre dette på, inkludert Biuret testen, Lowry-analysen, BCA-analyse og den Bradford assay, som alle har sine fordeler og ulemper. Til slutt, men de har alle i det vesentlige den samme informasjon: absorbans av en fortynnet prøve mot absorbanse ved samme bølgelengde for oppløsninger av standardkonsentrasjon. Når du har denne informasjonen, kan du bruke den til å beregne proteinkonsentrasjonen.

Bruksanvisning

1 Logg inn regnearkprogrammet og skriv inn data for de standarder i et nytt regneark. Sette "molaritet" av proteinene i standardoppløsningen i en kolonne og «absorbans" ved bølgelengden dere som brukes i en annen.

2 Grafen normer data og merke din graf. Sørge for at molariteten er på x-aksen og absorbans er på y.

3 Ved hjelp av de lineære regresjon eller trend line verktøy i regnearkprogrammet, finne en linje av best passer for dine data. Ta eventuelt kontakt regnearkprogrammet brukerhåndbok for instruksjoner.

4 Ta absorbans for ukjent konsentrasjon proteinløsninger og plugge dem inn i likningen avledet av regnearkprogrammet. Du kan bruke regnearkprogram til å gjøre beregningene for deg om det vil være nyttig.

Eksempel: Hvis regnearkprogrammet utledet ligningen y = 0,5 x + 0,4, hvor y er absorbans og x er molaritet, kan du løse denne ligningen for x ved å omorganisere det som følger:

(Y - 0,4) / 0,5 = x

og sett deretter i absorbans måling for y som følger:

(0,5 til 0,4) / 0,5 = x

0,1 / 0,5 = 0,2 mol per liter

Hint

• Legg merke til at proteinkonsentrasjonen vanligvis beregnes i form av mikrogram per mikroliter i stedet føflekker per liter, selv om du kan bruke molariteten i stedet hvis du foretrekker det.