Hvordan bestemme sekvensen Grunnlag av en DNA Strand

I 1980 Frederick Sanger vant sin andre Nobel pris for utvikling av en metode for å syntetisere deler av DNA og avslutte tråden hver gang en viss DNA basis vises. Dette tillot forskere for å bestemme sekvensen baser av en DNA-tråd, og ble brukt for å sekvensere det humane genomet ved Human Genome Project. Aktuelle metoder omfatter polony, Solexa og ion halvledersekvensering. Imidlertid er Sanger metode fremdeles er mye brukt og, på grunn av dens relative enkelhet, er et godt eksempel på hvordan DNA-sekvensering virker.

Bruksanvisning

1 Sett opp fire kanner med fire reaksjonsblandinger. Legg til hvert begerglass av DNA som skal sekvenseres, DNA-polymerase og en tilførsel av nukleotider A, C, G og T.

2 Legg til en variant av en av de fire fluorescensmerkede kjedeterminerende variabler i hver nukleotider, slik at hvert beger har en annen terminerende variabel med et annet fluorescerende markør.

3 Kombiner innholdet i alle fire reaksjons begre i ett beger. Kjør reaksjoner på en elektroforese gel. Utlede DNA-sekvensen ved å lese den resulterende bildet fra den minste til den største stykket. De forskjellige fluorescerende markører identifisere hvilke nukleotid-baser tilsvarer hver del skape en særegen sett av bånd på elektroforese bildet.

4 Les sekvensen basis av DNA-tråden ved å tilordne en base til hvert av båndene som skapes av nukleotid-basene på elektroforese bildet.