Hvordan er antistoffer Målt?

Antistoffer er proteiner som kalles immune immunoglobuliner som er produsert som respons på deteksjon av et fremmedlegeme eller antigen, slik som bakterier, virus eller kreftceller. Det er fem hovedtyper av immunglobuliner i kroppen: IgA, IgG, IgM, IgE og IgD. Nivåer for hver type antistoff blir målt for å teste og behandling for kreft eller andre infeksjonssykdommer. Det finnes flere typer metoder som brukes for å måle antistoffer for forsker eller medisinske behov.

Enzyme-Linked immunosorbent assay

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) brukes for å bestemme mengden av antistoff eller mengden protein bundet til antistoffet i en blodprøve. Testen benytter antigen / antistoff-interaksjoner, hvor antigenet og antistoff danner komplekser. Antigenet eller antistoffet i prøven er merket med et enzym. Etter antigen og antistoff danner komplekser de er i stand til å bli detektert på en ELISA-plate. Enzymet på de komplekse reagerer med et substrat for å danne et farget produkt som kan telles på en plate teller for å bestemme mengden av antistoff som er tilstede i prøven.

Western blot

Western Blot-teknikk benyttes for å bestemme både molekylvekten av antistoffer, og de relative mengdene av antistoff som er tilstede i en prøve. Western blot teknikker gjør bruk av gelelektroforese for å separere antistoffer. Antistoffene blir overført til et nitrocellulose-ark og inkubert med generisk proteiner. En oppløsning inneholdende enzymer blir tilsatt for å binde seg til spesifikke antistoffer. Substrat ble tilsatt, og antistoffene blir inkubert for å omdanne de antistoff / enzymkomplekser til et farget produkt som kan vises og fotografert for å bestemme mengden av antistoff som er tilstede.

Fluorescens flowcytometrisystemer

Fluorescens flowcytometri er en teknikk som er i stand til å telle antistoffer gjennom måling av de cellulære og fluoriserende egenskaper av antistoffer. En laser passerer gjennom cellene og målingene bestemmes gjennom endringer i lysspredning lysabsorpsjon og lysemisjon, når den passerer gjennom detektorene i prøven. De resulterende lette endringer blir overført til en datamaskin program og manipulert til digitale signaler som vises i et diagram for å oppnå spesifikke celletelling for forskjellige typer av celler, så som antistoffer.

hemocytometer

Celletall på antistoffer kan utføres ved hjelp av et hemocytometer. En blodprøve oppløsning fremstilles i et Eppendorf-rør ved hjelp av en pipette. Trypan blå løsning ble tilsatt til oppløsningen for å merke noen døde celler og at blandingen tilsettes til hemocytometer. Den hemocytometer inneholder rutenettlinjer der celler er laget ved hjelp av en hånd telleapparat mens du ser rutenettlinjene i henhold til 10X kraft av et sammensatt mikroskop.