Hvordan finne Konsentrasjon Fra Absorbance
Spektrofotometri er en vanlig laboratorieteknikk for bestemmelse av oppløst stoff konsentrasjon i en oppløsning. Et spektrofotometer anvender et prisme eller diffraksjonsgitter for å velge lys av en ønsket bølgelengde og passere det gjennom testprøven. En detektor på den andre siden måler intensiteten av lys som treffer det. Målingen gir prosent av transmisjon og absorbans når instrumentet er riktig kalibrert. Etter at du har målt absorbans, finne konsentrasjonen er en grei beregning som er avhengig av en formel som heter Beer lov.
Bruksanvisning
1 Skriv ned følgende ligning: absorbans = (absorptivity)
(lengde) (konsentrasjon). Denne formelen kalles Beer lov. Du kjenner absorbansen fra eksperimentet, mens lengden komponenten er avstanden gjennom "kyvetten" - beholderen som brukes for å holde prøven i spektrofotometeret. For de fleste kyvetter avstanden er 1 cm, men du bør bekrefte det. Endelig er molar absorptivitet en konstant spesifikk for en gitt substans, oppløsningsmiddel og bølgelengde. Beregn molar absorptivity hjelp av absorbans av standardløsningene du målt i eksperimentet.
2 Skriv inn absorbans og konsentrasjon på minst fem standardutvalget som ble brukt i eksperimentet. Disse standardprøver har kjent konsentrasjon, slik at du kan bruke dem til å finne den molare absorptivity. Hopp over dette trinnet hvis du arbeider med et molekyl som DNA som molar absorptivity ved 260 nm er allerede kjent. For DNA, kan du bruke kalkulatoren under "Ressurser" nedenfor.
3 Bruk den grafiske program for å tegne grafer tabelldata med konsentrasjon på x-aksen og absorbans på y-aksen. Utlede en linje av best passer for disse dataene ved hjelp av programmet; denne ligningen skal være lineær. Den nøyaktige fremgangsmåten vil variere avhengig av den grafiske programmet du bruker; se brukerhåndboken for regnearkprogrammet eller den elektroniske hjelpen hvis nødvendig.
4 Plugg absorbans verdi for ukjente inn i line-of-beste-fit ligningen fra grafen din og løse for konsentrasjon. Alternativt, hvis du arbeider med et molekyl som DNA som molar absorptivity ved en gitt bølgelengde allerede er kjent, plugge absorbans inn i Beer lov formelen du skrev ned. Dele absorbans ved lengde og ved den molare absorpsjonsevne konstant. Denne operasjonen vil gi deg konsentrasjonen i mol per liter.