Hvordan isolere Lysozyme Fra Eggehvite

Lysozym, ellers kjent som muramidase, er et 129 aminosyre (129 aa) rest enzym, og det er forholdsvis liten. Det er tilstede i kylling eggehvite og også i slimhinne sekresjon såsom spytt og tårer. I 1922, Alexander Fleming oppdaget lysozym og det har siden blitt anvendt som et hovedformål for røntgenanalyse i mange år. Nå blir brukt som et anti-kreft legemiddel, og også for behandling av HIV-infeksjon. Den antibakterielle egenskap av eggehviten er på grunn av tilstedeværelsen av lysozym.

Bruksanvisning

1 Ta en liter eggehviter. Legg 150 ml av en 10 prosents suspensjon av bentonitt i en prosent kaliumklorid. Rør blandingen kraftig i 3 til 5 minutter uten å gjøre et skum.

2 Separer leire fra suspensjonen i en Sharples sentrifuge. Vaske den med 0,5 molar fosfatbuffer ved pH 7,5.

3 Ta 300 ml av en 5 prosent vandig oppløsning av pyridin. Vask leire med denne løsningen. Gjenta dette tre ganger for å fjerne inaktive adsorberte proteiner. Ta den samme mengde av pyridin-løsning og tilsett svovelsyre for å justere pH-verdien til 5,0. Vask leire to ganger hver med 300 ml pyridin oppløsning ved pH 5,0. Dette resulterer i eluering av lysozym. Sentrifuger leire i en satsvis sentrifuge for å fjerne eluatene.

4 Plasser de aktive eluatene i en cellofan pose og dialyser mot rennende vann fra springen. Pass på at ingen lukt av pyridin gjenstår. Tørk det oppløste stoff for å få den lysozym pulver. I stedet for denne metoden kan du også legge til 75 prosent alkohol eller aceton til eluatene og gjøre en dialyse for å få lysozym.

Hint

• Fullføre hele prosessen i løpet av 24 timer for å få de beste resultatene.