Hvordan lage SDS-PAGE Gels

SDS-PAGE står for natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese, og er en vitenskapelig teknikk som gjør det mulig å skille proteiner ved deres molekylvekt på en gel gjennom anvendelse av en elektrisk strøm. Teknikken muliggjør identifikasjon av ukjente proteiner og kvantifisering av proteiner. Den polyakrylamid virker som et medium gjennom hvilket proteinene vandrer og visualiseres. Lage dine egne SDS-PAGE-geler for elektroforese er en ganske enkel prosedyre og krever bare grunnleggende laboratorieerfaring.

Bruksanvisning

1 Vask hendene og ta på deg gummihansker. Lag din oppløsende gel mester blanding ved å blande 400 ml vann, 250 ml 1,5 M Tris pH 8,8 og 10 ml 10 prosent SDS.

2 Lag din løse gel. Bland sammen 1,98 ml 30 prosent akrylamid, 3,96 ml løse gel mester mix, 60 pl 10 prosent APS og 2,4 mL av TEMED. Dette vil gjøre 6 ml løse gel.

3 Monter dine plast plater sammen slik at de justeres perfekt. Clip bunnen og begge sider av platene med plast klipp. Hell den oppløsende gel mellom platene med pipette. Tilsett noen dråper etanol på toppen av den oppløsende gel med en pipette. La gelen stivne ved polymerisering i 30 minutter.

4 Fjerne etanolen fra toppen av den oppløsende gel ved å forsiktig helle den ut i en vask. Skyll toppen av gelen med avionisert vann og hell den av. Sett forsiktig et papirhåndkle mellom plast plater til å absorbere overflødig vann på toppen av løse gel.

5 Lag din stabling gel mester blanding ved å kombinere 340 ml vann, 62,5 ml 1,0 M Tris pH 6,8 og 5 ml 10 prosent SDS.

6 Bland 0,5 ml 30 prosent akrylamid, 2,51 ml stabling gel mester mix, 30 pl 10 prosent APS og 3 pl TEMED å gjøre stabling gel mix. Pipetter 2 ml av den stablings gel på toppen av den oppløsende gel, mellom plastplatene. Sett SDS-PAGE gel kam mellom plast platene. La gelen for å tørke i 10 til 15 minutter. fjerne SDS-PAGE gel kam forsiktig ved wiggling den frem og tilbake og trekke opp og utover.