Hvordan redusere ikke-spesifikk antistoffbinding

Hvordan redusere ikke-spesifikk antistoffbinding


Antistoffer brukes som reagenser i immunologiske studier som er rettet mot og etikett proteiner. Ved å merke et antistoff med et fluorescerende molekyl, og slik at dette antistoff til å binde til antigenene av interesse, kan molekyler lokaliseres gjennom et fluorescerende mikroskop. Noen ganger kan antistoffer bindes til antigener eller proteiner som ikke er spesielt på grunn av høy-reaktive antigen områder. Reduksjon av ikke-spesifikk antistoffbinding er kritisk for gyldighet i immunologi fargingsresultater. Under en indirekte normal immunologi farging prosedyre, er det lurt å sette inn et trinn mellom de to antistoff programmer for å redusere ikke-spesifikk binding.

Bruksanvisning

1 Bland geiteserum med normal skylling buffer ved en konsentrasjon på 2 prosent serum. Denne blandingen vil fungere som en blokkerende middel ved å binde seg til noen ikke-spesifikke, reaktive, endogene antistoffer.

2 Anvende geit serum-blokkerende middel etter å trekke det primære antistoff ut fra prøven.

3 La det blokkerende middel på prøven i 1 time ved værelsestemperatur på en ristemaskin.

4 Tegn av blokkeringsmidlet.

5 Skyll prøven i 15 minutter tre ganger ved hjelp av normal skylling buffer.

6 Påfør sekundært antistoff.

7 Fullføre den immunologiske fargeprosedyre i henhold til protokollen.