Hvordan Synkron Cell Cycles

I cellebiologi er det ofte nødvendig å koordinere eller "synkronisere" celler i en kultur, slik at mesteparten av cellene er på samme utviklingstrinn eller mitose samtidig. Denne synkroniseringen gjør det mulig for forskere å undersøke hvordan celleutviklingen blir påvirket av forskjellige endringer i cellenes vekstbetingelser slik som temperatur og lys forskjeller, eller innføring av kjemikalier eller virale midler. Synkroniseringen krever stansing celle utvikling når cellen har nådd et visst stadium. Mange metoder finnes for å stoppe utvikling; en av disse er å innføre et stoff som nocodazol til cellekulturen.

Bruksanvisning

1 Skill medium fra cellekultur. Skyll cellekultur med ti ml av fosfatbufferoppløsning.

2 Plasser skyllet kulturen i en petriskål med komplett medium med nocodazol. Inkuber fatet med kulturen og mellom på 37 grader Celsius i 12 timer.

3 Fjern fatet fra inkubatoren. Skyll den med den voksende medium, og trykk deretter på fatet lett. De runde mitotiske celler vil riste løs og kan kastes.

4 Overfør den komplette medium fra petriskålen inn i polypropylenrør. Lukk rørene sentrifuger deretter dem ved 1000 x g (ca. 1600 rpm) i 10 minutter.

5 Bruk pipette for å fjerne supernatanten (væsken i de sentrifugerte rør). Tilsett 15 ml fosfatbufferløsning til hvert rør for å resuspendere det gjenværende faststoff (cellepelleten). Sentrifuger rørene ved 1000 xg i 10 minutter.

6 Bruk pipette for å fjerne supernatanten i hvert rør. Legg komplett medium (uten nocodazol). Cellene er nå klar til bruk for eksperimentet.

Hint

• Hver lab har en annen oppskrift for fullstendig medium og voksende medium. Følg lab protokoller.