Hvorfor bruke buffere i HPLC?

Væskekromatografi med høy ytelse (HPLC) er en vanlig måte å instrumentell kjemisk analyse. En viktig komponent i alle HPLC-metode er den bestemte mobilfaseløsningsmiddel som anvendes for å oppløse og transportere analytten kjemikalier. Mange mobile faser er bufret til å styre forandringer i pH og sikre at testmetoden gir nøyaktige og presise resultater.

buffere

En buffer er en spesielt formulert løsningsmiddelløsning som oppviser bare små endringer i pH-verdien når sterke syrer eller baser tilsettes til den. Buffere fremstilles ved oppløsning av en svak base og dens konjugerte syre eller en svak syre og dens konjugerte base i et løsningsmiddel. Når syrer eller baser tilsettes til en buffer, syre-base-likevekten som allerede eksisterer i oppløsningen kompenserer automatisk for tilsetningen, med det resultat at det er forholdsvis liten endring i pH-verdien i oppløsningen.

Buffer og Ioniserbare kjemiske forbindelser

HPLC kan brukes til å analysere ioniserbare kjemiske forbindelser. Dette er forbindelser som lett kan danne ioner i oppløsning, slik som karboksylsyrer. Generelt sett bør slike forbindelser analyseres i sin ikke-ionisert tilstand, der de vil vise konsistent atferd i form av deres løselighet og interaksjoner med HPLC kolonne emballasjen. Buffere tillate mobil fase pH-verdien til å bli "låst" til en viss bestemt område der arten av interesse er kjent for å være i sin ikke-ionisert tilstand. I tillegg, buffere motstå lokale forandringer i pH forårsaket av forbindelsene selv.

Generelt Buffer Bruk

Buffere bør brukes når en ioniserbar art er analytten. Disse inkluderer organiske syrer, slik som sorbinsyre og benzosyre. Organiske baser som inneholder aminfunksjonelle grupper bør også analyseres ved hjelp av bufret mobile faser. Eksempler på slike organiske baser innbefatter nikotin og metamfetamin. Bufrede mobile faser kan også brukes til å analysere ikke-ioniserbare forbindelser for å tvinge forurensningene inn i enten sin ioniserte eller ikke-ioniserte form, slik det kreves for å sikre at de ikke forstyrrer analysen av arten av interesse.

Vanlige Buffered mobilfaser

Generelt bør syren dissosiasjonskonstant, pKa, av bufferarter være nær den pH-verdi som er ønsket for bufferen. I tillegg bør den mobile fasen typisk være minst halvparten vann til bruk sammen med uorganiske bufferarter. For lave pH-verdier i nærheten av 2 til 3, det mest vanlige buffersystemet består av natrium- eller kaliumsalter av fosforsyre. Dersom en flyktig buffer er nødvendig, kan acetat eller formiat anvendes. Et typisk område for bufferarter konsentrasjon er fra 10 til 50 millimol pr liter.