Konkurranse Elisa Protokoller

ELISA-testen er en enzymkoblet immunosorbent assay som bruker antistoffer eller antigener som er koblet til et spesifikt enzym for å bidra til å måle konsentrasjonen av antistoffet eller antigenet. Hvis du gjør en ELISA test og du ikke er i stand til å bruke spesifikke antistoffer å målrette måling, er konkurranse ELISA test foreslått for bruk fordi den bruker en enzymbundet antigen istedenfor antistoffet og en annen påvisningsmetode.

Mål Bruke fargeendringer

En vanlig protokoll for konkurrerende ELISA er ved hjelp av ikke-merket renset primært antistoff. Antistoffet ble belagt på brønnene i en mikrotiterplate og inkubert med ukjente standarder. Immunogen blir deretter tilsatt for å konjugere med det primære antistoff, hvor det vil binde seg til bindingssetene på antistoffet som ikke allerede er opptatt av den ukjente immunogen. Et substrat blir så brukt til å opprette en fargeendring for måling av binding konsentrasjon.

Ved hjelp av en ELISA Reader for Måling

Bruk en polystyren mikro-titer-plate og legge det primære antistoff til hver brønn i platen. Å tilegne seg maksimal binding, fylle brønnen med en mikrogram av antistoffet. Platen inkuberes i fire timer ved romtemperatur. Legge til den primære fangst-antistoffet og vaskes brønnene med PBS (fosfatbufret saltvann). Inkuber platene med blokkeringsbuffer i to timer ved romtemperatur. Vask brønnene igjen to ganger med PBS og legge til standardene til brønnene til det antigen-konjugat løsning til brønnene og inkuberes igjen i to timer. Vask platen en gang med PBS fire ganger. Legg underlaget og måle tettheten på målet bølgelengde ved hjelp av en ELISA-leser.

Direkte Competitive ELISA (cytokrom c)

For en direkte konkurrerende ELISA må utføres en krysser seriefortynning analyse for antigenet som man bruker i eksperimentet. Mikro titer plate blir deretter belagt med cytokrom c og inkubert over natten. ELISA del av forsøket utføres deretter ved tilsetning av blokkerende reagens og sekundært antistoff. Absorpsjonsegenskapene Resultatene avleses med en mikroplateleser.

Inkuber primær antistoff i rør

I denne prosedyren, er det primære antistoff inkubert i prøverør, hvor antigenet av interesse bindes til antistoffet. Prøvene blir deretter lagt inn i mikro titer plater brønnene og inkubert. Brønnene blir deretter vasket for å fjerne ikke-bundede antigen-antistoffbindingskomplekser og deretter blokkeringsløsning blir tilsatt for å holde det sekundære antistoff fra å feste til brønnene. Det sekundære antistoff blir deretter avlest på en plateavleser for resultater.