lydbehandling tips

Lydbehandling er en allestedsnærværende brukte metoden for klipping åpne celler i molekylær, mobilnettet, mikrobiologi og andre laboratorier. Sonikering er nyttig som den ikke endre den kjemiske sammensetningen av cellene eller cellenes buffer, og påvirker ikke ladning av cellene som electroporation fremgangsmåter gjør. Det er en ganske enkel prosess som bør justeres avhengig av ens eksperiment og celletyper som brukes, og det er bare noen viktige tips å følge.

Prosessen

Først fremstille celleprøve i dens passende buffer eller medium, og avkjøle denne prøven i et beger med is (eller isvann for raskere kjøling). Vask dysen til ultralydmaskinen med vann, og tørk av med en Kimwipe.

Slå Ultralyd / Mobil Disruptor maskinen på, og justere utgangseffekt til en passende watt, avhengig av celletype og eksperiment. Sett dysen til ultralyd inn mobilprøverøret og slå på maskinen; tillate ultralydbehandling for å opptre i fem til 30 sekunder av gangen. (Slik at ultralydbehandling i mer enn 30 sekunder drastisk varmer opp prøven og kan ofte føre til denaturering.) Mens ultralydbehandling, forsiktig flytte prøverøret rundt dysen, slik at dysen tilgang til ulike områder i volumet. Det er vanligvis best å ikke tillate spissen av dysen for å komme nær overflaten av volumet, da dette kan forårsake bobler / skumming av prøven.
Etter den første ultralydbehandling, blande prøven ved å snu flere ganger, deretter sonicate igjen for en lik tidsperiode, all den stund holder prøven på is.

Optimalisering er viktig

Det er vanligvis best å optimalisere lydbehandling protokoll for hver annen cellelinje som brukes, så må man finne en ideell balanse mellom nok celler skåret og minimal denaturering / skade av prøven. Dette kan gjøres ved sonicating for ulike tids lengder og Utgangseffekt innstillinger, deretter sjekke cellene under et mikroskop for fraksjonering.

For eksempel kan man starte ved å gjøre tre fem-sekunders bursts på 50 prosent strøm, deretter øke tid og energi om bare en liten del av cellen befolkningen vises fraksjonert under mikroskopet.

spesifikk Eksempel

For eksempel, E. coli-celler anvendt for vekst og rensing av en overflate-reseptor-bindingsprotein (C-terminalt fragment av Clostridium perfringens enterotoksin eller "C-CPE") kan sonikeres i et volum på 7 til 10 ml for to 30 -Andre bursts på maksimum utgangseffekt. Cellesuspensjonen Bufferen 1 x PBS med 0,2 mg / ml lysozym.
Sonikasjonen enhet som brukes til dette er en Microson Ultrasonic Cell Disruptor.