Mammalian Cell Lysis protokoller

Cellelyse er det bryte åpen av celler, mens forårsaker så lite skade på proteiner, organeller, DNA og andre makromolekyler som mulig. Cellelysering blir brukt for et antall celler og molekylærbiologiske teknikker, inkludert Western blotting-analyse av proteiner, Southern blotting og undersøkelse av DNA-sekvensen. Molekylet eller organelle under studien vil bestemme hvilken metode som brukes for å lysere cellen.

Mekanisk

Det finnes en rekke mekaniske metoder for å lysere cellene, inkludert blandemaskiner, ultralyd og homogenisatorer. Denne metoden baserer seg på bladene for å slipe og forskyve vev og celler. Det ofte brukes for celler som er vanskelige å lyse, så som mikroorganismer. Imidlertid kan komplekse vev, slik som lever eller nyre, krever mekanisk lyse. Mekanisk lysering resulterer ofte i en viskøs løsning som er vanskelig å klargjøre. Varmen som genereres kan denaturere proteiner av interesse.

buffere

Vaskemidler ofte blir brukt for å lysere pattedyrceller. Denne metoden er mildere ved å forstyrre cellenes membraner. Det vaskemiddel som velges vil avhenge av hva teknikker cellelysatet skal brukes for, og cellene som skal lyseres. Cellene og buffere ofte holdes kaldt hvis du studerer proteiner for å hindre deres denaturering. Andre hensyn er pH og saltkonsentrasjoner, og hvis inhibitorer er nødvendig for å forhindre denaturering av proteiner.

Freeze Thaw

Cellene kan fryses og tines, og over et antall sykluser, vil cellen lyse. Denne metoden fører til at cellen sveller og iskrystaller form, noe som fører til cellemembranen til å bryte og slipper innholdet i cellen. En studie av Haifeng Yu og kolleger for Bio-Rad, 2006, viste at tilsetningen av en fryse-tine syklus med ultralydbehandling, i pattedyrcelletyper, forbedret følsomhet for noen proteiner sammenlignet med bare ultralydbehandling.

flytende Homogenisering

Celler blir tvunget gjennom en trang plass, som bryter ned cellemembranen. Et antall forskjellige typer av homogenisatorer er tilgjengelige, selv om utstyret kan være kostbart. Antallet ganger som cellene har til å passere gjennom avhenger av cellene og utstyr som brukes. Utbytte, men kan være variabel.