Metoder for Chiral HPLC

Det er mange forbindelser som har den samme kjemiske formel og struktur. Imidlertid kan disse forbindelser variere basert på den romlige anordning av forbindelsene rundt det sentrale punkt. Dette romlig arrangement menes kiraliteten av kjemikaliet. Kirale forbindelser kalles isomerer. Isomerer kan videre deles inn i enantiomerer, cis- og trans-enantiomerer, epimere, anomerer og syn- eller anti-isomerer. Den eneste måten å skille ut kirale forbindelser er ved hjelp av kirale kolonner i HPLC.

Reversfase HPLC

Inklusjonskompleks kolonnene er brukt i revers fase HPLC-systemer. Det vil skille de kjemikalier basert på båndene av av en ringstruktur. Vanligvis forbindelser med obligasjoner i meta posisjon elueres først, forbindelser deretter med orto obligasjoner og til slutt forbindelser med para obligasjoner. Den beste separasjon oppstår når det foreligger sterke hydrogenbindingsgrupper til stede i kjemikalier struktur. Andre faktorer som kan påvirke separasjonen i reversfase HPLC inkluderer temperatur, strømningshastighet, konsentrasjon av buffer, type buffer, organisk modifiserende middel og pH. Reversert fase kirale comlumns kan skille alle typer isomerer.

Normal fase HPLC

Chirla kolonner som kan brukes for normal fase HPLC fungerer best når den dominerende interaksjonen er hydrogenbinding eller π - rc insteractions. Normal fase HPLC er best på å skille ut nøytrale forbindelser, som ikke er sterkt polar eller ikke polar.

Polar Organisk fase

Polar organisk fase HPLC fungerer best på isomerer som bruker hydrogen binding og dipol-dipol bindinger. Denne type av HPLC brukes kun på syklodekstriner og derivater av cyklodekstriner. Innenfor den polare fasen er det mulig å påvirke selektiviteten av isomerer ved å endre syre til basen forhold. Bibehold av de forskjellige isomerer også kan endres. For å øke retensjon av forbindelser er det best å fjerne metanol, og for å redusere konsentrasjonen av syren og baseforhold. For å redusere retensjonen av forbindelsen deretter øke metanolkonsentrasjonen og øke konsentrasjonen av syren og baseforhold. Denne versjonen av HPLC fungerer best på polare kjemikalier.

Polar Ionic

Polar ionisk HPLC brukes bare på makrosykliske glykopeptider som bruker hydrogenbinding og ioneinteraksjon. Det er mange fordeler med denne type isomer separasjon som det forlenger levetiden på HPLC-kolonnen, produserer effektive kjemiske separasjoner, har høyere fordampning priser og er mindre giftig enn tradisjonelle HPLC som bruker heksan. Polar ionisk HPLC er best for de forbindelser som er ioniserbare.

spesialiserte kolonner

Specialized eller tilpasset kirale HPLC-kolonner kan produseres hvis du ser på en bestemt type molekyl eller sammensatte. Snakk med din lokale HPLC leverandør. Også se på den nyeste forskningen som forskere gjør mye av metodeutvikling på ulike typer kiralt separasjon ved hjelp av HPLC. Noen kan allerede ha utviklet en metode for forbindelse av interesse.