Mikrobiologi fargeteknikker

Mikrobiologi fargeteknikker


Ufargede celler er vanligvis klar eller gjennomsiktig, noe som gjør dem vanskelig å se og studere. Derfor mikrobiologer flekker bakterier for å forbedre sin kontrast og synlighet under mikroskopet. Farging kan også hjelpe forskerne å skille mellom ulike typer bakterier. For eksempel, å avgjøre om en bakterie er Gram-positive eller Gram-negative er et viktig skritt i å identifisere en ukjent bakterieisolat.

Typer av fargestoffer

Fargestoffer som brukes som biologiske flekker er vanligvis organiske salter omfatter en farget ion og en ufarget ion. I et basisk fargestoff, er det fargede organiske positivt ladet ion, så det er trukket mot negativt ladede stoffer. Cytoplasma av bakterieceller har en tendens til å suge opp grunnleggende fargestoffer. Sure fargestoffer, derimot, inneholder en negativt ladet organisk ion at bakterien overflate frastøter; Disse fargestoffer har en tendens til å sette flekker rundt i organismen, noe som skaper en farget bakgrunn mot hvilken bakterien er gjennomsiktig. Andre fargestoffer, som India blekk, er pH-nøytralt.

gram Stain

Gram stain deler bakteriene inn i to klasser: de som tester positivt på Gram flekken, og de som ikke gjør det. Dette skillet gjenspeiler en strukturell forskjell. Gram-positive bakterier har en tykk cellevegg som er rik på peptidoglykaner, mens Gram-negative bakterier har et tynt lag av peptidoglykaner klemt mellom en indre og ytre membran. Det første trinnet i Gram-farging, er å anvende krystallfiolett, etterfulgt av Gram jod; bakterier slikke krystallfiolett fargestoff, som samler med jodidionene. Deretter ble en kort behandling med aceton, fjernes krystallfiolett fra Gram-negative celler; det påvirker ikke flekken i Gram-positive celler, fordi deres celleveggen peptidoglykan er mye tykkere. Til slutt, en anvendelse av safranin counterstain slår Gram-negative bakterier rosa. De Gram-positive bakterier, derimot, beholde den krystallfiolett, og følgelig synes purpur under mikroskopet.

Ziehl-Neelsen Stain

På grunn av sammensetningen av deres cellevegger, noe farget bakterier er "syrefaste", som betyr at de ikke skal miste sin farge hvis de utsettes for en fortynnet syre. Mycobacterium tuberculosis, bakterien som forårsaker tuberkulose, er et fremtredende eksempel. Farging et prøvestykke med Carbol fuksin fargestoff mens varme den opp, avfarvende prøven med en syre, og deretter kontra det med et annet fargestoff vil avdekke hvorvidt syrefaste bakterier er til stede. Denne prosedyren kalles Ziehl-Neelsen flekken.

Metylenblått Stain

I denne prosessen, blir bakteriene plassert på et lysbilde, varme-drepte og farget med et basisk fargestoff som kalles metylenblått. Denne flekk gjør det lettere å inspisere morfologi, eller form, av bakteriene. Noen bakterier er stavformet, mens andre er sfærisk eller til og med spiral; metylenblått farging hjelper mikrobiologer gjenkjenne disse strukturelle forskjeller.

India Ink

Denne teknikken involverer susp mikrober i saltløsning, og deretter å farge dem med tusj. Under mikroskopet, er India blekk veldig mørkt; hvis en mikrobe har en geléaktig kapsel, vil den skille seg ut tydelig mot denne bakgrunnen. Dette er kjent som en negativ flekk, fordi snarere enn farging mikroben, det farger mikroben omgivelser på lysbildet. Denne teknikken er spesielt nyttig når du arbeider med visse sopp, spesielt Cryptococcus neoformans.