Noen Kjennetegn på Protein Nedbør av Salts
Ved lave konsentrasjoner, kan salt bidra til å stabil proteiner i løsning og dermed forbedre deres oppløselighet. Ved høyere konsentrasjoner, men saltet reduserer mengden av vann som er tilgjengelig for å hydratisere proteiner og, forbi en viss terskel, vil proteinene begynner å utfelles. Legge til salt for å fjerne proteiner fra løsningen kalles "salting ut."
løselighet
Noen proteiner er mer vannløselige enn andre. Hvis et protein har flere hydrofile ( "vannelskende") områder, vil det være mer løselig enn en som er mer hydrofobe ( "vann-fryktet"). Som saltkonsentrasjonen øker, vil de mindre oppløselige og mer hydrofobe proteiner utfelles først. Nært beslektede proteiner kan ikke skilles ved utsalting, fordi de vil utfelles på omtrent den samme saltkonsentrasjon, men proteiner som har svært ulik struktur og egenskaper kan ofte bli separert på denne måten.
salter
Ammoniumsulfat er de mest populære salt for denne fremgangsmåten, fordi den har meget høy oppløselighet i vann, selv ved meget lav temperatur. Vanligvis du ønsker å holde løsningen kaldt å hemme aktiviteten av proteaser, proteiner som hogge opp andre proteiner. Saltkonsentrasjonen er vanligvis beskrevet ved prosentandel av metning, hvor 25 prosent er 25 prosent av metnings (den konsentrasjon ved hvilken ikke mer salt kan oppløses).
sentrifugering
Vanligvis er saltet tilsettes gradvis til proteinoppløsningen under omrøring den hurtig (en magnetrører er meget nyttig for denne type prosedyre). Oppløsningen blir sentrifugert, forårsaker noen av proteinene for å felle ut. Ofte er denne prosedyre vil bli delt opp i flere trinn. Du kan for eksempel starte med 25 prosent av metning (25 prosent kutt), så gå til en 75 prosent kutt. Denne prosessen gjør det mulig å dele proteiner inn i tre grupper - de som utfelles på 25 prosent, de som utfelles på 75 prosent og de som bunnfall i mellom.
betraktninger
Utsalting vil medføre et visst tap av proteinet man ønsker å isolere. Hvert protein har sin egen oppløselighet kurve - oppløseligheten av proteinet som funksjon av oppløst stoff konsentrasjon ( "ionestyrke"). Følgelig, selv om den økte saltkonsentrasjonen er tilstrekkelig til å utfelle alle av proteinet av interesse, kan det likevel utfelles noe av det. Videre kan du ikke bruke salting ut til å isolere et bestemt protein, fordi andre proteiner vil utfelles sammen med det. Vanligvis utsalting er bare det første trinn i en proteinrenseprosess.