rekombinante metoder

Et stykke av rekombinant DNA omfatter DNA fra to forskjellige kilder --- for eksempel et gen for en fluorescerende protein inkorporert i genomet av en helt annen art. Forskere bruke en rekke teknikker for å manipulere nukleinsyrer, bli stykker av DNA og sette inn disse rekombinante sekvenser i andre celler. Disse teknikkene er viktig i moderne bioteknologi.

restriksjonsenzymer

Restriksjonsenzymer, noen ganger kalt restriksjonsendonukleaser, foreta kutt i DNA på steder som er angitt ved nærvær av en spesiell gjenkjennelsessekvens. Den mest nyttige klasse av restriksjonsenzymer, type II enzymer, gjøre kutt på anerkjennelse nettstedet. Når de gjør et kutt, la de en "sticky end" med en overhengende enkeltrådet slutten på DNA-molekylet. Siden klebrige ender fra to stykker av DNA kuttet med samme enzymet er komplementære, kan forskerne kutte to stykker av DNA slik at de vil ha komplementære ender, så bli med dem sammen.

ligation

Forskere ofte bruke plasmider, små sirkulære biter av DNA som finnes i mange bakterier, for å lage kopier av et gen med rekombinant DNA-teknologi. Både plasmidet og den del av DNA som de ønsker å sette inn er kuttet med de samme to restriksjonsenzymer; nå både plasmid og innsatsen har tilsvarende klebrige ender. Ruger disse delene av DNA med et enzym kalt ligase limer de samsvarende klebrige endene sammen. Dette siste trinnet kalles ligering eller re-ligering.

Transformation

Noen bakterier kan naturligvis ta opp stykker av DNA fra sine omgivelser. Favoritten laboratorium arbeidshest, e. coli, er ikke blant disse artene; Det kan bli indusert til å ta opp DNA, men ved først å inkubere det i en kalsiumkloridløsning på is deretter kort inkubering det ved fysiologiske temperaturer (ca 37 grader Celsius). Noen liten brøkdel av f.eks. coli-bakterier ta opp plasmidene i oppløsningen. En annen lignende teknikk, elektroporasjon, involverer elektrisk "sjokkerende" e. coli ved å kjøre en strøm gjennom oppløsningen; igjen, dette fører til en liten brøkdel av dem for å ta opp plasmid-DNA. Begge disse fremgangsmåter --- eller hvilken som helst annen metode som induserer bakteriene for å ta opp fremmed DNA --- kalles transformasjon.

selektive Media

Noen bakterier inneholder nå rekombinant plasmid, men hvordan vet vi hvilke bakterier gjør, og hvilke som ikke gjør det? Den vanligste måten å skille transformerte celler fra resten innebærer å dyrke bakteriene på "selektive medier." For eksempel, en agarplate inneholdende ampicillin, et antibiotikum, vil tjene. Hvis plasmid inneholder et gen som gir resistens mot ampicillin, vil bare bakterier som tok opp plasmidet overleve og vokse. Disse metodene gjør det mulig for forskere å sette inn gener i bakterier eller lage kopier av et stykke av DNA.