Slik feilsøker DNA Gel elektroforese
Gelelektroforese anvendes i biologi, og kan anvendes for å separere DNA-molekyler i henhold til størrelse. En skuff av gel med bufferoppløsning er forbundet til en elektrisk strøm som tiltrekker nukleinsyremolekylene i DNA. Kortere molekyler reise raskere enn lengre seg i gel. Når elektroforese er fullført, bør du være i stand til å vise et mønster av band på gel som kan analyseres og brukes som data. Men det er tilfeller når resultatene ikke blir som forventet, men heldigvis finnes det enkle løsninger for hver type problem.
Bruksanvisning
1 Fullfør DNA gel elektroforese prosessen. Hvis du etter 30 til 45 minutter er det ingen brukbare resultater, forberede seg til å feilsøke eksperimentet.
2 Hvis bandene er veldig svak eller ikke-eksisterende, er det sannsynlig at det er et problem med DNA-prøven. Prøv å øke mengden av DNA brukes samtidig unngå nuklease forurensning, og sørg for å bruke riktig buffer for å hindre DNA fra å bli denaturert. Det er også en mulighet for at den DNA ble kjørt ut av gelen, så forsøke å electrophorese for en kortere tidsperiode eller senke spenningen.
3 Utflytende DNA-bånd kan også indikere problemer med DNA. Vær oppmerksom på nuklease forurensning, riktige bufferbetingelsene, mengden av salt til stede og nærvær av overskudd av proteiner for å hindre at DNA fra å bli forringet eller denaturert. For mye DNA på gelen kan også lage flekkete band, så prøv å redusere mengden brukt.
4 Noen ganger kan det hende at enkelte band mangler fra resultatene. Hvis det mangler mindre band, kan de ha blitt presset ut av gelen. Prøv å bruke en lavere spenning eller redusere tiden. Hvis det mangler større band, er det en sjanse for at komponentene ikke har skilt helt ennå. Dette kan enkelt løses ved å øke elektroforese tid.
5 Inkonsekvent målinger indikerer problemer med elektroforese prosessen. Kontroller temperaturen på gel og spenningen er hensiktsmessig. Også alltid bruke en tilstrekkelig mengde av bufferløsning.
Hint
- Vær tålmodig, selv om du må kjøre elektroforese noen times.Keep oppmerksom på at ulike typer gel har ulike egenskaper. Sjekk for detaljert informasjon om gel typen før eksperimentet.
- Sørg for å bruke elektrisk kilde med forsiktighet.