Slik feilsøker en HPLC-system

Væskekromatografi med høy ytelse er en metode for separering av en blanding av forbindelser for å rense, identifisere og kvantifisere hver komponent. HPLC benytter en pumpe til å passere en blanding av interesse i løpet av en fast fase i en kolonne, og måler den tiden som er nødvendig for forbindelser til å passere over den faste fase. Retensjonstid varierer avhengig av styrken av interaksjonen mellom den faste fase og forbindelsen av interesse, sammensetningen av det anvendte løsningsmiddel, og strømningshastigheten reguleres ved pumpen. Forbindelsene blir visualisert med en topp tilsvarende en UV / synlig absorpsjon ved en spesifisert bølgelengde.

Bruksanvisning

Trinn for Feilsøking en HPLC

1 Bytt ut det gamle filteret og frit ved å skru sine respektive dekker, kaste bort det gamle filteret eller fritte, og legger til en ny. Skru deksler tilbake på tett. Dette vil eliminere tilstopping i ledningene.

2

Stramme mutterne før og etter kolonnen ved anvendelse av en skrunøkkel av en passende størrelse.

3

Bruke kortest mulig røret med minst mulig diameter for å koble kolonnen med resten av systemet. Dette vil eliminere ekstra kolonnevolum som kan forstyrre forbindelsen deteksjon.

4 Vask kolonnen med minst 3 kolonnevolumer av et sterkt oppløsningsmiddel før tilsetning av forbindelsene. Dette vil eliminere forurensning og luftbobler.

5 Overvåk så mange bølgelengder som mulig med HPLC-system. Velg bølgelengde som gir den klareste topp tilsvar til din sammensatte. Et enkelt, stående, spisse topp bør følges. Bred, split, eller tailing toppene er et tegn på at er nødvendig med feilsøking.

6 Oppløs forbindelsen av interesse i forskjellige løsningsmidler og injisere dem på kolonnen. Hvis toppene er brede, split, eller hale på slutten, kan du prøve et annet løsemiddel system.

7 Test ulike injeksjons størrelser ved å angi mikroliter mengder i programmet for å sikre kolonnen overbelastning er ikke ansvarlig for tailing, bred, eller dele topper.

8 Teste forskjellige løsningsmiddelsystemer for mobile fasen. Forskjellige prosentandeler av vann og organiske løsningsmidler kan anvendes. Overvåk peak størrelser og former for å finne den optimale løsemiddelsystemet.

9 Test strømningshastigheten for forbindelsene som blir ført over kolonnen ved å angi forskjellige priser og overvåking av kolonnetrykket og maksimal størrelse og form.

10 Dersom kolonnetrykket er for høy, fjerne kolonnen og krok slangen sammen. Kjør løsningsmiddelsystem gjennom røret og overvåke trykk. Hvis systemet har høyt trykk uten kolonne tilstede, kontroller filter, frit, og linjer på nytt. Dersom trykket er lavt uten kolonne til stede, fester kolonnen og skylle den med et sterkt oppløsningsmiddel for å eliminere eventuelle blokkeringer.

Hint

• Bruk alltid verneutstyr når du arbeider i et laboratorium. Dette inkluderer en laboratoriefrakk, vernebriller og hansker.