Slik feilsøker HPLC kolonner

Kolonnen av et høyytelses-væskekromatografi (HPLC) maskin er den stasjonære fasen av ekstraksjonsprosessen. Væsken - typisk en bufferløsning - kontinuerlig strømmer over kolonnen er den mobile fasen. Som kjemikalier som injiseres i HPLC de flyte med den mobile fasen over søylen og elueres ved forskjellige og bestemte tider for å fremstille et kromatogram. Høyden på toppene på kromatogrammet forteller deg hvor mye av den kjemiske i din analysert prøven. Kolonne problemer føre til dårlige resultater, så feilsøking er viktig.

Bruksanvisning

1 Start opp HPLC og la det oppnå for hvor mye tid som er standard i laboratoriet protokollen. I mellomtiden, utgjør den analytiske standard (e) som brukes på HPLC (dette vil variere avhengig av hva din lab og HPLC-analyser). Når maskinen har likevekt, injisere en standard på maskinen - dette gjøres enten for hånd ved hjelp av en sprøyte eller ved å laste maskinens autosampler.

2 Se på kromatogrammet produsert ved standard. Dette er din beste indikasjonen for kolonne problemer. Følgende trinn vil presisere vanlige kolonne problemer som ble funnet fra denne kromatogram.

3 Sjekk eluering tid - tiden det tar for standard topp skal vises. Resultatene vil variere for ulike kjemikalier, men laboratoriet bør ha et "best case scenario" tid for en topp skal vises. Hvis peak dukker opp veldig tidlig, indikerer dette materialet inni kolonnen ditt er å bryte ned og kolonnen må skiftes. Hvis toppen er veldig langt ut dette kan tyde på kolonnen ble ikke forberedt godt. I dette tilfellet kan kolonnen fremdeles brukes hvis topp er likevel god nok til at lab behov (jo lenger elueringstiden, jo mindre topp vil bli).

4 Undersøke formen av toppen. Ideelt du ønsker en topp som stiger kraftig og har en symmetrisk form. Et bredt "bakke-liknende" topp angir at materialet i kolonnen er å bryte ned det samme gjør en topp som "haler" - har en lengre skråning i den ene enden enn den andre. I begge disse tilfellene kan kolonnen fortsatt brukes hvis resultatene er gode nok for dine behov. For å forlenge levetiden på kolonnen kan du være i stand til å "snu" den (fjerning av kolonne og snu den til å flyte motsatt vei). Dette kan re-pakke materialet inne, men fungerer ikke alltid.

5 Undersøk baseline (linjene som fører opp til topp). Hvis linjen ikke er jevn, blir dette betegnet "støy" i referanse. Sharp, fjerning av støy er sannsynlig elektrisk, men tilfeldig "humpete" støy kan indikere kolonnen har forurensninger. Prøv å kjøre frisk mobile fasen over kolonnen for å rense det. Hvis det fortsatt er støyende, følg lab-protokollen for å rehabilitere kolonnen. Hvis det fortsatt er støy må du erstatte kolonnen. Noe støy kan tolereres så lenge det ikke forstyrrer målingene.

Hint

• feilsøking HPLC krever tålmodighet. Prøv en ting om gangen for å løse problemer og la maskinen god tid til å stabilisere seg mellom forsøk.
• Alltid holde mobilfase og injeksjonssprøyte ren. Ikke berør nålen på sprøyten med hendene eller du kan introdusere hudfett inn i kolonnen.
• Bruk standard lab sikkerhetsprotokoller ved arbeid på HPLCs.