Slik pakker du ut Lactoferrin

Slik pakker du ut Lactoferrin


Laktoferrin er produsert av eksokrine kjertler og finnes i blodplasma og melk hos pattedyr. Som et transferrin glykoprotein det binder seg til og transporterer jern. Når skade eller sykdom som forårsaker betennelse, nivåene av laktoferrin øker. Dens rolle i immunsystemet er under studien. Laktoferrin er vist å virke som et antibakterielt og den hindrer veksten av virus og parasitter. Studier viser også laktoferrin evne til å bremse tumorvekst og bistand i bein utvikling. På grunn av sitt potensial, er laktoferrin utvinning fra biologiske væsker viktig for mange forskningsområder.

Bruksanvisning

1 Filtrering av myse eller melk gjennom grovt filterpapir for å fjerne faste stoffer og de fleste mikroorganismer som fremdeles er tilstede. For enda finere filtrering bruke et mikrosystem med en 300 mikrometer porestørrelse filterpapir.

2 Sett opp din HPLC pumpe med en 5- til 10 centimeter lange kolonnen. Den optimale kolonnen for denne prosessen inneholder SP Sepharose store perler. Disse kolonnene er tilgjengelige fra GE Healthcare. Plasser en samling begerglass ved den frie ende av kolonnen.

3 Injiser filtrert melk eller myse inn i pumpen ved hjelp av injeksjonssprøyten eller pumpens autosampler. Injiser omtrent 100 kolonnevolumer av melk eller 300 kolonnevolumer av myse inn i kolonnen. (Kolonne volum er hvor mye væske kolonnen vil holde, sjekk din spesifikke kolonnen for dette volumet.)

4 Injisere saltfosfatbuffer (mindre enn 0,7 molar natriumklorid) inn i kolonnen. Den elute (væsken som blir utvist ut av kolonnen) vil inneholde laktoferrin. Du kan gjenta trinn 3 og 4 til kolonnen blir tett (du vil være i stand til å tvinge væske gjennom).

5 Avsalte den elute du samlet. Dette kan gjøres ved ionebytting, elektrodialyse eller ultrafiltrering, avhengig av hva som er mest praktisk for laboratoriet. Den optimale metode er ved ultrafiltrering.

6 Tørk din elueres. Resultatet vil bli laktoferrin. Frysetørking er den optimale metode for tørking, men vakuumtørking og spraytørking arbeid samt avhengig av utstyret laboratoriet har tilgjengelig.

Hint

  • Det finnes andre metoder for laktoferrin utvinning, men denne metoden har vist seg effektive for utvinning av melk.
  • De første gangene du prøver dette, bør du ha en kjøpt laktoferrin prøve på hånden. Du kan deretter lage standarder fra utvinning og fra den kjøpte laktoferrin og analysere dem på en HPLC å teste din for renhet.