Slik utfører Peroxidase Flekker

Påvisning av antistoffer er viktig for både laboratorieforskning og klinisk diagnostikk. Normalt antistoffer er usynlig. Hvis du ønsker å påvise antistoffer i et stykke vev, må du bruke et annet enn bare å se gjennom et mikroskop strategi. Alkalisk fosfatase-farging og peroksidasefarging er to slike fremgangsmåter. I peroksidasefarging er et enzym kalt peroksydase, som ligger i antistoffene, som brukes til å katalysere en kjemisk reaksjon, som resulterer i en farget membran.

Bruksanvisning

1 Bland 10 ml naftol-derivat og den flaske benzidin-derivat løsning for å lage et fargestamløsning.

2 Bland 200 ml H3PO4-sitronsyre bufferoppløsning og den flaske med hydrogenperoksyd.

3 Plassere 50 ml av bufferoppløsningen til en 50 til 100 ml målesylinder.

4 Legge til 2,5 ml av den fargestamløsningen ved hjelp av mikropipette og bland.

5 Plasser denne fargeløsning i et plastbrett.

6 Vask membranen med saltoppløsning (fosfat-buffret saltvann eller Tris-bufret saltvann) og dyppe det i fargeløsningen. La den trekke i mellom 10 minutter og en time.

7 Når båndet blir synlig, fjerner membranen og skylles under rennende vann i 10 minutter for å stanse reaksjonen.

Hint

• Bland løsningene rett før du bruker dem. La reaksjonen finne sted i 10 minutter før bruk av løsningen. Ventet 30 minutter kan gi falske resultater.
• Membranen skal suge ved romtemperatur.
• Vaske alle sylindere og skuffer i vann, og deretter i en svovelsyreoppløsning (ca. 1 mol av svovelsyre pr liter vann) i 30 minutter eller mer; skylling med deionisert vann. La dem tørke helt.
• Oppbevar membranen på et mørkt sted.
• Ikke la anstrengstamløsning berøre huden din. Hvis den gjør det, vask straks med vann.