Tester for Gram-negative bakterier

Gram-negative bakterier gir et negativt resultat på Gram-farging testen fordi de har både en indre og en ytre membran med et tynt lag av peptidoglyans i mellom. Når mikrobiologer har fastslått at et isolat er Gram-negative, kan de utføre diverse andre biokjemiske tester for å begrense omfanget av muligheter og identifisere slekten.

karbohydrat Fermentering

I denne testen ble bakterier dyrket i medium inneholdende en pH-indikator fenolrødt, sammen med et mindre rør satt inn opp-ned i reagensglasset. Vanligvis fire rør brukes - en med glukose kjøttkraft, en annen med laktose, en tredje med sukrose og en fjerde med mannitol. Når bakterier fermenterer sukker, frembringer den sure biprodukter som reduserer oppløsningens pH-verdi, forårsaker den fenolrød-indikator for å gulne. Noen bakterier kan også lage alkaliske produkter, selv om karbohydrat gjæring testen ikke er designet for å oppdage disse. Bakterier kan kategoriseres basert på hvilke typer sukker de gjære, og om de produserer syre og gass eller syre alene.

SIM Test

SIM-testen har tre separate tester i en enkelt, praktisk prosedyre. Bakteriene blir introdusert inn i agaren ved å stikke den med en inokulering løkke. Agar inneholder en blanding av aminosyrer og to indikatorer, bly nitrat og Kovac reagens. Dersom bakteriene forbrenne de svovelholdige aminosyrer, hydrogensulfid-skjemaer og kombinerer med blynitrat, dreie agar svart. Dersom bakteriene forbrenne aminosyren tryptofan, danner de indol som reagerer med Kovacs-reagens, noe som gjør en lys rød ring. Til slutt, hvis bakteriene er i stand til å bevege seg, spre de utover fra det punkt hvor de først ble innført. Hvis de ikke kan bevege seg, forblir deres vekst konsentrert rundt stedet der agar opprinnelig ble knivstukket.

Citrate og urease tester

Citratet testen bruker grønn-farget citrat agar, som inneholder sitronsyre og en pH-indikator. Hvis bakteriene har citrate permease enzymet, de forbrenne citrate og produserer alkaliske produkter som gjør at pH-indikator for å endre farge til blå. Urease test, derimot, bruker en oransje urinstoff kokes med en fenol rød indikator på lave nivåer. Noen bakterier har et enzym kalt urease og kan bryte ned urea til karbondioksid og ammoniakk. Ammoniakk er alkalisk og forandrer pH. Hvis suppen blir rødlilla, bakteriene er urease-positive.

Fenylalanin deaminase Test

Denne testen benytter agar inneholdende aminosyren fenylalanin. Dersom bakteriene innføres i agaren besitte enzymet fenylalanin deaminase, bryter de ned aminosyren til fenylpyrodruesyre ved fjerning av aminogruppen. Bakteriene får lov til å vokse på en stund, da jern-III-klorid tilsettes. Fargen vil enten forbli uendret, i hvilket tilfelle bakteriene ikke har enzymet, eller det vil slå olivengrønn, i hvilket tilfelle bakteriene har enzymet.

Identifikasjon

Disse testene kan anvendes for å identifisere Gram-negative bakterier som hører til en vanlig påtruffet-slekten. Salmonella, for eksempel, er laktose negativ, urease negativ, PA deaminase negative og syre bare (uten gass) positiv for glukose, og den kan bevege seg (er bevegelig). E. coli, derimot, er laktose positiv, glukose negativ, negativ citrat, hydrogen-sulfid negativ, indol-positiv og i stand til å bevege seg. Ved å utføre disse testene, kan mikrobiologer finne ut hvilken type bakterier som var til stede i en prøve, noe som er spesielt viktig for sporing av sykdomsutbrudd.