Elektroforese Buffer Klargjøring
Gel elektroforese er en av de mest vanlige prosedyrer utført i biokjemi og molekylærbiologiske laboratorier. Denne fremgangsmåten krever bruk av en bufferløsning som skal utføres på riktig måte. Å vite hvordan å forberede bufferløsning sikrer en klar tilførsel når behovet oppstår.
Funksjon
Effektiv gelelektroforese krever en bufferoppløsning. Under elektroforese blir gelen matrisen neddykket i en løsning som gjør det mulig for elektrisk ledningsevne og opprettholder en jevn pH-verdi. Konsentrasjonen av bufferløsningen spiller også en viktig rolle i frekvensen av migrering av molekylene som blir separert. En høy konsentrasjon av buffer vil føre til hurtigere migrering. I tillegg til å velge konsentrasjonen av bufferen brukes under en elektroforese prosedyre, typen av buffer anvendes også spiller en viktig rolle.
buffer~~POS=TRUNC Typer
De to buffere som er mest brukt i løpet av gelelektroforese er tris-acetat-EDTA (TAE) og tris-borat-EDTA (TBE). Bestemme som buffer for å bruke, avhenger av en rekke faktorer. TAE er meget effektiv for å separere fragmenter større enn 4,000 basepar. Det er også anvendes for å separere super-kveil-DNA.
TBE er mest effektive for fragmenter mellom ett og 3000 basepar i lengde. Det er også den mest effektive løsningen når du bruker spenning mengder som overskrider 150 volt.
Utarbeidelse av TAE
Forbereder en 50X lager TAE Løsningen innebærer tre trinn og fire ingredienser. For hver liter oppløsning ønsket, bland 242 g Tris-base med 600 ml avionisert vann til det er oppløst. Legg 57.1 ml iseddik og 100 ml 0,5 molar EDTA, pH 8,0. Til slutt, tilsett avionisert vann inntil sluttløsningsvolumet kommer til en liter. Oppbevares godt dekket ved romtemperatur.
Utarbeidelse av TBE
For å fremstille en liter 50X lagerløsning TBE, kombinere 540 g Tris-base med 600 ml avionisert vann og rør til det er oppløst. Bland i 275 g borsyre og 200 ml 0,5 molar EDTA, pH 8,0. Legg avionisert vann inntil den totale løsningen volum når en liter. Autoklav i 20 minutter og deretter oppbevares tett tillukket ved romtemperatur.
Fortynning og bruk
Disse sterkt konsentrerte stamløsninger kan deretter fortynnet til mindre konsentrasjoner som er nødvendig ved blanding av mindre mengder av stamløsninger med avionisert vann.