Hva er funksjonen til en Tris buffer i DNA Extraction?
Tris, eller tris (hydroksymetyl) aminometan, er en vanlig biologisk buffer, brukt i hele den DNA-ekstraksjon prosessen. Under ekstraksjonen fra en rekke kilder, er DNA-pH-følsom. I løpet av cellelyse, fjerning av uønskede cellulære komponenter og nedbør, er tris benyttes for å opprettholde en stabil pH. I tillegg spiller det en spesielt viktig rolle i cellelyse.
Tris som en buffer
Som pH kan påvirke, og påvirkes av en rekke cellulære faktorer, opprettholde en stabil pH-verdi er vesentlig for eksperimentell vitenskap. Biologiske buffere, slik som tris, er viktige fordi de kan opprettholde en stabil pH-verdi til tross for påvirkninger som ellers kan forskyves pH-verdien. Tris (hydroksymetyl) aminometan, med en pKa-verdi på 8,1, er en effektiv buffer mellom pH 7 og 9. På grunn av sin nøytrale området, er tris en vanlig buffer i biologiske laboratorier. Imidlertid er tris-buffer temperaturfølsom og skal brukes ved den temperatur ved hvilken det opprinnelig ble Phed for å unngå unøyaktighet.
Lyse av celler
Lysis, eller bryte åpne celler, er det første trinn i DNA-ekstraksjon. Dette oppnås ved en buffer inneholdende tris og EDTA (etylendiamintetraeddiksyre). EDTA binder toverdige kationer slik som kalsium og magnesium. Siden disse ionene å opprettholde integriteten av cellemembranen, noe som eliminerer dem med EDTA destabiliserer membranen. Tris er hoved bufringskomponent; dens viktigste rolle er å opprettholde pH i buffer ved et stabilt punkt, vanligvis 8,0. I tillegg tris sannsynligvis samhandler med LPS (lipopolysakkarid) i membranen som tjener til å destabilisere membranen ytterligere.
Tris Beskytter DNA fra pH Flytter
Når cellene er brutt fra hverandre, deres DNA og innholdet renne inn i bufferen. I tillegg, RNase A (ødelegger RNA), proteaser (ødelegger proteiner) og SDS (natriumdodecylsulfat, oppløseliggjør membranfragmenter) er ofte inkludert. Tatt sammen, kan denne suppe av cellulære innhold og fragmentert RNA og proteiner ha en stor innvirkning på pH-verdien av oppløsningen. Fordi DNA er pH-følsomme, er det viktig for tris å bufre suppe og opprettholde pH ved en jevn punkt.
DNA Nedbør
I den siste fasen av DNA-ekstraksjon blir DNA ekstrahert seg fra oppløsningen. På dette punkt er den DNA oppløselig i bufferen. For å trekke ut fra oppløsningen, blir DNA gjøres uoppløselig ved tilsetning av etanol eller isopropanol (isopropylalkohol). Når dette er gjort, DNA bli tydelig i oppløsning som et hvitt thready substans. Selv om DNA kan isoleres fra de gjenværende cellulære komponenter på denne måten, er det ikke er "brukbare" når det er uoppløselig. Etter isolering blir alkoholen fjernes, og DNA må returneres til en biologisk buffer, slik som tris, som skal brukes.
Gjør det selv
Selv om utvinning av DNA er ofte gjort i forskningslaboratorier generelt ved hjelp av en av en rekke kommersielt tilgjengelige kits, alle kan gjøre DNA-ekstraksjon hjemme ved hjelp av vanlige husholdningsartikler og grønne erter eller spinat. I dette tilfellet, tris, og heller ikke noen biologisk buffer, er ikke til stede for å beskytte DNA fra pH-skift. Men det er en visuell måte å hjelpe elevene til å få kontakt med mobilnettet DNA.