Hvordan beregne HPLC resolusjoner

Kjemikere bruke væskekromatografi, eller HPLC, for å skille blandinger av forbindelser. Generelt er fremgangsmåten består av å injisere en prøve inn i en kolonne hvor den blander seg med ett eller flere oppløsningsmidler. Forskjellige forbindelser adsorberes, eller "stick", til kolonnen i forskjellig grad; og som løsningsmiddel skyver forbindelsene gjennom søylen, vil en av komponentene i blandingen går ut av kolonnen først. Instrumentet registrerer man får forbindelsene som de kommer ut av kolonnen og gir et kromatogram som består av et plott med retensjonstid på x-aksen og signalintensitet fra detektoren på y-aksen. Ettersom forbindelsene går ut av kolonnen, de produserer "topper" i kromatogrammet. Generelt, jo lenger fra hverandre, og den smalere toppene i kromatogrammet, desto høyere oppløsning. Forskere mener en oppløsning på 1.0 eller høyere for å representere en tilstrekkelig separasjon.

Bruksanvisning

1 Mål breddene av to tilstøtende topper i kromatogrammet ved å notere hvor x-akseverdiene er ved foten av hver topp. X-aksen representerer retensjonstid, vanligvis målt i sekunder. Hvis således en topp begynner på 15,1 sekunder, og ender på 18,5 sekunder, er dens bredde (18,5 til 15,1) = 3,4 sekunder.

2 Bestemme oppholdstidene ved å notere den tid, det vil si, plasseringen på x-aksen, som tilsvarer plasseringene av maksima av toppene. Denne verdien vil normalt være omtrent halvveis mellom de to verdiene som brukes til å beregne bredden i trinn 1. Eksemplet gitt i trinn 1, for eksempel, ville oppvise et maksimum ved omtrent 16,8 sekunder.

3 Beregn oppløsning, R, mellom to topper ved

R = (RT1 - RT2) / [0,5 * (W1 + W2)]

hvor RT1 og RT2 representerer retensjonstider av toppene 1 og 2, og W1 og W2 representerer breddene av toppene tatt ved sine baser. Fortsetter eksempel fra trinn 2 og 3, oppviser en topp en retensjonstid på 16,8 sekunder og en bredde på 3,4 sekunder. Dersom den andre topp viste en retensjonstid på 21,4 sekunder med en bredde på 3,6 sekunder, og oppløsningen ville være

R = (21,4 til 16,8) / [0,5 * (3,4 + 3,6)] = 4,6 / 3,5 = 1,3.