Hvordan redusere ikke-spesifikk binding til Containere

I en Immunoanalyse bindingskapasiteten i en beholder eller i mikroplatebrønner er høyere enn mengden av protein som er lagt inn i beholderen eller brønner. For å redusere eller forhindre antistoffer eller andre typer av proteiner og molekyler fra å absorbere til beholderen eller brønner, må analysen vaskes med den passende buffer, og en spesifikk blokkerende reagens må legges til. Typen av buffer og den blokkerende reagens velges, avhenger av hvilken type eksperimentell analyse.

Bruksanvisning

1 Smør plate brønner med antigenet. Bruk et antigen fortynning. Rene oppløsninger av antigenet er ikke nødvendig siden bare omtrent 3 prosent av proteinet i prøven er målproteinet. Ved fortynning sikre at prøvene inneholder antigenet i en konsentrasjon som er innenfor rekkevidden av antistoffet. Pipetter antigen fortynning løsning ned platebrønnene. Noen plater kan være forhåndsbelagt med antigen. Les instruksjonene som følger med platebrønnene.

2 Dekk platene med en selvklebende plast og inkuberes over natten. Vask platene med bufferoppløsninger, for eksempel tris-bufret saltvann eller fosfat-bufret saltløsning. Å vaske, skylle platene ved hjelp av en klemme flaske fylt med bufferløsningen over et laboratorium vask. Pat platene med et papirhåndkle for å fjerne eventuelle gjenværende dråper bufferløsning.

3 Redusere ikke-spesifikk binding av proteiner og molekyler ved hjelp av en blokkeringsbuffer eller reagens, slik som en detergent blokkering, tørrmelk eller bovint serum. Den type blokkerende reagens som anvendes vil avhenge av analysen. Tilsett blokkerende reagens til brønnene ved hjelp av en pipette. Dekk platen igjen med selvklebende plast og inkuber natten.

4 Re-platen vaskes brønnene igjen ved hjelp av en bufferoppløsning. Disse trinnene vil redusere mengden av ikke-spesifikk binding som kan forekomme i de platebrønner før tilsetning av den nødvendige antistoff-løsning for inngrepet. Dessuten kan de blokkerende reagenser som bidrar til å redusere bakgrunnsfarger i resultatene av analysene.