Hvordan Reset en C18 kolonne

Høytrykks-væskekromatografi (HPLC) er et verktøy for separering av kjemikalier fra en blanding. Separasjon og identifikasjon av bestemte kjemikalier i en blanding skjer først og fremst på HPLC-kolonnen i systemet. Mange typer av kolonner er tilgjengelige for HPLC-systemer, og hver type er beregnet for en bestemt type analyse. Den C18-kolonne er den sterkest ikke-polare kolonne generelt anvendt. Etter kontinuerlig bruk over en lengre tidsperiode, strømningshastighet for oppløsningsmiddel gjennom kolonnen reduseres og strekker seg analysetiden for en analyse. En annen årsak til den langsomme ned av analysen er å ha prøvene la små mengder kjemikalier på kolonnematerialet og redusere muligheten for søylen for å skille kjemikalier. Regenerering av kolonnen overflate det er oppnådd ved behandling av emballasjematerialet til en bestemt serie av oppløsningsmidler for å rense ut eventuelle prøver som forblir i kolonnen og fornye bærermaterialet.

Bruksanvisning

1 Koble fra C18-kolonne fra strømningen og erstatte kolonnen i motsatt retning. Kjøring av oppløsningsmidlet tilbake gjennom kolonnen i den motsatte retning vil løsne pakningen virkning som oppstår over tid. Forsiktighet må utvises for ikke å miste mye av emballasjematerialet fra den ende av kolonnen. Noen produsenter bruker et større maske ved oppstrømsenden av kolonnen, slik at når strømningsretningen reverseres større mesh er i den nedstrøms posisjon. Denne fremgangsmåten for regenerering er betegnet tilbakespyling. For å beskytte mot emballasjematerialet å strømme til detektoren i systemet og muligens forårsake en plugg, at systemet kan kjøre uten detektoren hektet opp og lede utstrømningen av kolonnen til avfall.

2 Plasser løsningsmidlet innløpsrøret inn i en serie av oppløsningsmidler for å bevirke at elueringen av eventuell gjenværende forbindelser med kolonnen i motsatt retning. Rekken av løsningsmidler som benyttes variere i deres hydrofile egenskaper. Ved å variere løsningsmidlene vil eluere forbindelser med like variert hydrofile natur. Bruk 50 ml av hver av de følgende løsningsmidler i rekkefølge: vann (hvis man bruker en buffer i løsningsmiddel), metanol, isopropanol, diklormetan, heksan, diklormetan og isopropanol.

3 Koble kolonnen i riktig retning og kjøre løsemiddel gjennom systemet. Bruk minst 75 ml oppløsningsmiddel for å vaske kolonnen før fortsetter. Kjør en test injeksjon av en standard som du kjørte da kolonnen var ny og kontrollere resultatene. Vær spesielt oppmerksom på rush retensjonstider, tailing av topper og total analyse tid. I hvilken grad disse attributtene matche med den første løp for kolonnen da den var ny vil indikere hvilken grad kolonnen er regenerert. Hvis resultatene ikke er tilfredsstillende, må du bytte kolonne med en ny og kaste den gamle kolonne i søpla.