elektroblot Protocol

Biologer ofte behov for å skille proteiner og nukleinsyrer (DNA og RNA) på grunnlag av størrelse eller ladning, ved bruk av en teknikk som kalles gelelektroforese. Etterpå kan biologer overføre prøven fra gelen til et membran for identifikasjon. Dette er kjent som elektroblotting.

gel elektroforese

I gel-elektroforese, bevirker et elektrisk felt proteiner eller DNA-fragmenter til å reise gjennom en skive av gel. Mindre fragmenter eller proteiner bevege seg raskere enn større funn.

Når proteiner eller fragmenter er atskilt, kan biologer overføre dem til en membran, og heller beis dem, eller å bruke antistoffer til å identifisere spesifikke proteiner.

elektroblotting

Selv om den nøyaktige protokollen varierer, elektroblot vanligvis inkluderer følgende trinn.

Etter elektroforese, forskere plasserer gel skive oppå flere ark med filter papir og en svamp midt i en overføring bufferløsning. De plasserer deretter en nitrocellulose eller PVDF membran over gel, og dekke den med flere filterpapir.

Påføring av et elektrisk felt som forårsaker de negativt ladede fragmenter eller proteiner for å migrere oppover fra gelen til membranen. På dette punktet, kan forskere fjerne og sonden membranen.

betraktninger

Når lagdeling membranen og gel for elektroblotting, er det viktig å fjerne luftbobler, da de kan hindre migrering av de proteiner eller nukleinsyrer.

Elektroforese etterfulgt av elektroblotting er typisk en foreløpig til vestlig, Northern og Southern blotting, som alle kan identifisere spesifikke DNA / RNA-fragmenter eller proteiner.