Hvordan forberede Elektroforese Gel

Elektroforese anvender en svak elektrisk strøm for å separere blandinger av ladede partikler. Metoden innebærer å plassere et litt ledende gel i en rektangulær plastbrett med elektroder i begge ender. Experimenter deretter injiserer en prøve, slik som DNA, inn i gelen. En likestrømtilførsel tilveiebringer et potensial over elektrodene. De negativt ladede partikler deretter vandrer mot den positive elektrode, og de positivt ladede partikler migrerer mot den negative elektrode. Forskere har publisert en rekke gel formuleringer. Det beste valg av gel er avhengig av stoffet som separerte, selv om agarose representerer den mest allsidige av gelene.

Bruksanvisning

buffer Klargjøring

1 Vei ut 54 g tris base, 27,5 g borsyre og 4,7 g etylendiamintetraeddiksyre-dinatriumsalt, eller Na2EDTA, på en balanse og overføre de faste stoffene til et 1-L Erlenmeyer-kolbe.

2 Fylle kolben til ca. 750 ml med destillert vann og deretter virvle kolben til innholdet er fullstendig oppløst.

3 Tilsett mer destillert vann til kolben til et endelig volum på 1 liter, og 1000 ml. Virvel flasken for å blande innholdet, og deretter overføre løsningen på et glass lagring flaske. Merk flasken "5X Tris buffer."

gel Forberedelse

4 Fortynn 5X tris-buffer til 0,5 x ved å helle 10 ml av 5X Tris-buffer i en 100-ml målesylinder, og deretter tilsetning av destillert vann til et sluttvolum på 100 ml.

5 Vei 1 g agarose på en balanse og overføre pulveret til en 250 ml Erlenmeyer-kolbe. Legg til kolben på 100 ml av 0,5 x tris-buffer.

6 Virvel innholdet i kolben for å danne en oppslemming, og deretter plassere kolben i en mikrobølgeovn og varme høye i 30 sekunder. Etter 30 sekunder av oppvarming, fjern kolben fra mikrobølge ved hjelp av en ovn mitt, og virvle løsningen kraftig.

7 Gjenta forrige trinn for inntil agarose og buffer danne en klar løsning, men tillater ikke agarose å koke. Når løsningen blir klar, er agarosegelen klar for støping i en elektroforese magasinet.