Hvordan identifisere Gram positive Rods

Siden 1880-årene, forblir Gram flekken test en viktig metode for bakteriell identifikasjon og klassifisering. Mikrobiologer ofte utføre Gram test som første skritt i å identifisere bestemte typer stavformede bakterier fra slekten Bacillus. Gram farging er oppkalt etter sin oppfinner, dansk bakteriologen Christian Gram. Teknikken fungerer på grunn av en forskjell i gram positive og gram negative bakterielle celleveggen fysiologi. Visse gram positive stenger føre til alvorlige sykdommer som miltbrann og stivkrampe.

Bruksanvisning

1 Sikre anvendelse av en ren, aseptisk laboratorium plass for å gjennomføre Gram-flekk-testen. Bruk rene lab klær og sko belegg for å hindre forurensning. Bruk hansker og maske ved håndtering av bakteriekulturer. Isolere en koloni av bakterier for test og vokser det ut på næringsrik agar i petriskåler. Sterilisere petriskåler og agar med en trykkoker før bruk.

2 Tilsett noen dråper rent vann til kultur fatet. Fordel den jevnt over agar. Dra en vaksinasjon sløyfe lett over agar overflate. Overfør prøven på et rent glass lysbilde og smøre det jevnt i sirkulært område på størrelse med en krone. Holde størrelsen på prøven minimal; du bør være knapt i stand til å se det med det blotte øye.

3 Påfør 95 prosent metanol over glide smøre i to minutter å fikse cellene og forhindrer forvrengning av deres morfologi. Air tørke lysbildet eller varme den forsiktig over en lav Bunsen brenner flammen. Flytt glide back-og-tilbake til varmen jevnt og unngå lokale hot spots. Påfør varmen jevnt og konsekvent. Unngå å ta den gli ut av flammen til du er ferdig med å varme den.

4 Hell krystallfiolett flekken reagens over fast lysbilde. La det stå i 30 til 60 sekunder. Vask av flekken med vann fra springen i noen få sekunder. Drenere overflødig vann fra raset. Dekk lysbildet med jod flekken reagens i 30 til 60 sekunder. Vask av jod med vann fra springen. Vipp raset og tilsett noen dråper decolorizer. Bruk den til avrenning er ren. Vask raset.

5 Sug lysbildet med rosa-farget safranin mot flekker reagens i 30 sekunder. Du kan erstatte grunn fuksin løsning for safranin. Vask forsiktig raset og rist av overflødig vann. Blot den tørr med tørkepapir og deretter lufttørke lysbildet. Undersøke den fremstilte glide under et mikroskop utstyrt med en lyskilde. Se etter og identifisere gram positive bakterier stenger med blå eller fiolett farge fra Gram flekken test.