Hvordan lage en Bis-Tris Transfer Buffer

Koblingen av bis-tris er viktig i biokjemi grunn av sin evne til å virke som et zwitterion, som har en positiv og negativ ion på molekylet. Det kan virke som en buffer i området av pH 7,6. Det er lagt til gelene som anvendes i elektroforese for å bidra til å holde molekyler i oppløsning og hjelpemidler i separasjonen av molekyler. Overfør buffere fjerne molekyler fra gel plater av elektroforese analyse og overføre dem til membraner for western blotting. Hver produsent av elektroforese utstyr rapporter litt forskjellige oppskrifter for å lage en overføring buffer, men følgende er for overføring buffer brukes med NuPAGE systemer på ikke-redusert prøver.

Bruksanvisning

1 Forbered ingrediensene til buffer ved å veie ut mengder av hver komponent på en analytisk balanse. De tre tørre komponentene for en overføringsbuffer er bicin, bis-tris og EDTA. Vekt ut 4,08 g bicin, 5,23 g av bis-tris og 0,29 g EDTA på enkelte veier papirer.

2 Legg disse komponentene til et 250 ml begerglass. Oppløse disse komponentene med 100 ml metanol. Omrør inntil det faste materiale oppløses.

3 Overfør de oppløste komponenter til en 100 ml flaske og vask beger med ultrarent vann for å sikre overføring av alle komponentene.

4 Fylle det gjenværende av 1-liters volum med ultrarent vann. Tilsett vann i porsjoner som tillater tilstrekkelig blanding mellom hver tilsetning. bland grundig innholdet for å oppnå en jevn konsentrasjon.