Hvordan redusere HPLC Solvent Peak

Væskekromatografi med høy ytelse (HPLC) analyser prøvene man injiserer inn i en HPLC-maskin. Et løsningsmiddel kalt den mobile fasen strømmer kontinuerlig gjennom HPLC systemet og bærer prøven etter at det injiseres. Prøven skiller seg i sine bestanddeler molekyler som den beveger seg over HPLC-kolonne og et kromatogram som vises på systemets dataskjermen. Ved begynnelsen av kromatogrammet for hver prøve er topp skapt av løsningsmidlet. Noen ganger er dette løsemiddel topp for stor og skjuler toppene av prøven. Når dette skjer, kan du prøve ulike tiltak for å redusere løsemiddel topp.

Bruksanvisning

1 Redusere følsomheten av HPLC. For eksempel, hvis du vanligvis kjører din HPLC 2 nanoamps, senke følsomheten til 5 nanoamps. Injisere en prøve for å se om oppløsningsmidlet topp er fortsatt for stor. Hvis toppen er fortsatt stort, og du kan fortsatt se toppen av prøven, redusere følsomheten igjen. Så lenge du fortsatt kan måle toppen av prøven, kan du fortsette å redusere følsomheten til løsemiddel toppen er liten nok.

2 Filter mobilfase løsemiddel for å fjerne urenheter som kan forårsake et bredt løsemiddel topp. Skru ned HPLC til null press, sette opp vakuumfiltreringssystem og deretter filtrere mobil fase. Hell den filtrerte løsemiddel i en ren kolbe og starte HPLC igjen. La maskinen stabilisere seg i ca. 30 minutter, og deretter injisere en prøve eller standard for å se om den filtreringen løst problemet.

3 Lag ny mobil fase. Hvis de to trinnene ovenfor ikke løste problemet, kan du ha gjort den mobile fasen galt. Lag en ny gruppe med mobil fase med de riktige ingrediensene i de mengder som er angitt av laboratoriets protokoll. pH løsemiddel og filtrere det før du setter den i bruk. Etter å sette den nye mobile fase på HPLC, la den ekvilibrere i 30 minutter og deretter kjøre en prøve eller standard for å se om den nye mobile fase løst problemet.

4 Endre kolonnen på HPLC. Over tid bærer materialet inni HPLC kolonne bort eller skiller, og dette gjør topper bredere. Følg laboratoriets protokoll for å pleie en ny kolonne for HPLC. Når kolonnen har hatt tid til å stabilisere seg (vanligvis over natten), kjøre en prøve eller standard for å se om løsemiddelet toppen er fortsatt for stort.

5 Endre mobil fase løsemiddel til en oppskrift som er mindre polar. Senking av polaritet vil gjøre prøvetoppen elute senere i kromatogrammet. Dette holder den borte fra den brede løsningsmiddelfronten. Eksempler på løsningsmidler med lav polaritet inkluderer eddiksyre, metanol og vann.

Hint

• På grunn av de mange forskjellige HPLC-systemer, kan denne artikkelen bare gi generelle retningslinjer. Se i laboratoriets protokoll eller HPLC manual for spesifikke instruksjoner.
• Endre noe på en HPLC tar tid. Gi HPLC nok tid til å stabilisere seg som du tester hvert trinn.