Slik feilsøker en Agilent HPLC

Slik feilsøker en Agilent HPLC


En høy-ytelse væskekromatografi (HPLC) analyser maskin laboratorieprøver ved injisering av prøven inn i maskinen. Etter hvert som stadig strømmer mobil fase (eller bevegelige fase) oppløsning av HPLC bærer prøven over HPLC-kolonnen, adskilt molekylene i prøven bli basert på størrelse og polaritet. De enkelte molekyler ut av kolonnen, og føre en elektrisk ladning av varierende intensitet, avhengig av konsentrasjonen av molekylet. En datamaskin koblet til HPLC leser elektrisk ladning. Dette viser seg på skjermen som en topp. Samlingen av topper fra prøven kalles et kromatogram. For å bruke en Agilent HPLC effektivt, må du vite hvordan du kan feilsøke problemer.

Bruksanvisning

trykk~~POS=TRUNC

1 Kontroller trykket av den HPLC-pumpe. Trykket vil variere avhengig av laboratoriets HPLC oppsett, og du bør vite hva normalområdet er. Hvis trykket er høyere eller lavere enn normalt, indikerer dette et problem.

2 Kontroller HPLC-pumpe for lekkasje dersom trykket er lavt. Lekkasjer oppstå når som helst kontakt og kanskje ikke åpenbart drypper. Sjekk for oppbygging av salter rundt noen kontakt. Dette er et tegn på en langsom lekkasje. Stram eventuelle beslag eller erstatte slitte beslag for å bøte på lavtrykk problemer.

3 Slå pumpen ned til null press og fjerne kolonnen hvis du opplever høyt trykk problemer. Med kolonnen av, slår maskinen tilbake til hvilestrømningshastighet (flow rate du forlater maskinen på over natten når den ikke er i bruk). Hvis det fortsatt er trykket uten kolonnen, skyll pumpen med en 50/50 acetonitril / vann blanding til trykket går ned. Hvis trykket forblir på null uten kolonnen festet, rehabilitere eller erstatte kolonnen per lab-protokollen.

støy~~POS=TRUNC

4 Slå på datamaskinen for HPLC og kjøre programmet som produserer dine kromatogrammene. Hvis grunnlinjen av kromatogrammet er støyende (ikke glatt) uten å injisere noen prøver i HPLC, er det enten forårsaket av skittent mobilfase eller elektriske forstyrrelser. Lag ny mobil fase i henhold til lab-protokollen. Bruk alltid HPLC-kvalitet vann til den mobile fasen, og filtrere den mobile fasen brønnen. Detektoren av HPLC må holde stengt hele tiden.

5 Injiserer utarbeidet standard i HPLC. Hvis det er støy bare når en prøve er injisert, må du kontrollere at du ikke injiserer eventuelle luftbobler inn i HPLC. Luftbobler resultere i store, spisse støytopper. Hvis du er sikker på at du ikke injisere luftbobler, er problemet sannsynligvis en uren løsning som brukes til å lage standard. Remake løsningen der du fortynne din standard, så remake standard.

6 Se baseline for støy som vises i en vanlig syklus. Dette blir vanligvis forårsaket av en luftboble i systemet. Slå pumpen til null press, fjerne kolonnen, og bruke rensefunksjon for å tvinge boble ut. Sett på kolonnen og vri pumpe tilbake til sin drift press. Unngå luftbobler ved å holde den mobile fase ved en konstant temperatur og avgassing av mobile fase per laboratoriet protokoll.

7 Sjekk baseline for fortsatt støy. Hvis grunnlinjen viser en serie av konstant og fjerning av støy i stedet for en rett linje, friske opp elektroder. Avhengig av modell av Agilent HPLC du har, kan elektroden konfigurasjon og vedlikehold varierer. Følg laboratoriets protokoll for rengjøring, polering og påfylling HPLC elektroder.

Peak Problemer

8 Injiser utarbeidet standard i HPLC. Hvis prøvetoppen ikke er symmetrisk, eller hvis toppdelinger (en topp vises som to), og kolonne emballasjemateriale den slites ned eller bli separert. Oppdater eller erstatte kolonne per lab protokoll.

9 Injiser utarbeidet standard. Hvis kromatogrammet viser topper som er mindre enn normalt, har du en følsomhet problem eller dine standarder er gammel. Remake standarder og kjøre dem på nytt. Hvis toppene er fortsatt liten, øke HPLC følsomhet for å få en større topp. En reduksjon i følsomhet over tid er normalt og indikerer at du trenger å kjøpe nye elektroder i nær fremtid. Endre din mobil fase ingredienser og regelmessig erstatte pumpen sel også bidra til å øke følsomheten.

10 Injisere en forberedt standard inn i HPLC. Hvis toppene er bredere enn normalt, betyr det at du trenger å rehabilitere din kolonne for å pakke kolonne pakking materiale. Sjekk også at du kjører den HPLC pumpe på riktig strømningshastighet, siden lavtrykk vil føre til toppene til å spre seg.

Hint

  • Prøv en ting om gangen for å fikse HPLC. Hver "fikse" krever maskinen til å re-stabilisere seg før du kan se om det hjalp. HPLC vedlikehold krever tålmodighet.
  • Ha alltid ekstra HPLC deler, som sel og kolonner, på hånden for HPLC vedlikehold.
  • Slå pumpen til null press helst du fjerne kolonnen fra pumpen. En plutselig reduksjon i trykket kan ødelegge pumpen sel.
  • Før du fjerner elektrodene, slå av HPLCs strømmen for å unngå støt.