Grunnleggende om HPLC
HPLC, også kalt høy-ytelses-væskekromatografi eller høytrykksvæskekromatografi, er et verktøy som brukes for å identifisere, kvantifisere, separering og rensing av kjemiske forbindelser. Det er vanligvis brukes i laboratorier av mat produksjon, farmasøytiske, gruvedrift og medisinske bedrifter for kvalitetskontroll og forskning. For å kunne bruke en HPLC på riktig måte, er det viktig å forstå funksjonen og formålet med de grunnleggende komponenter.
Mobile Phase
Den mobile fasen er sammensatt av en eller flere reagenser som sirkulerer gjennom HPLC i en bestemt strømningshastighet og forholdet. Reagenser blir lagret i mobilfase reservoarer og trekkes ut gjennom et rør ved hjelp av pumpen. Alt etter arten av prøvene, kan en isokratisk eller gradient mobilfase anvendes. En isokratisk fase opprettholder en jevn konsentrering av løsemiddel gjennom analyse og krever en oppløsningsreservoar. En gradient eluering varierer konsentrasjonen av mobil fase basert på et forhåndsinnstilt tidsplan.
Injector
Injektoren trekker et forhåndsinnstilt volum av væske fra prøveglass og injiserer det i den mobile fasen som strømmer gjennom systemet. Avhengig av den kjemiske reaksjon er nødvendig, og mengden av eksempler som er tilgjengelige, injeksjonsvolumer typisk variere fra 10 til 50 ml. De fleste moderne HPLCs er utstyrt med en automatisk injektor ligger innenfor et temperaturkontrollert kabinett.
Pumpe
Pumpen er ansvarlig for sirkulering av den mobile fase og prøve gjennom HPLC-systemet. Det kjører på en forhåndsinnstilt hastighet som bestemmer systemet press. Ulike typer pumper kan brukes med de fleste pumpe på trykk i henhold til 400 bar. Viktige deler av pumpen omfatter motoren, stempel, sel, tilbakeslagsventiler og rense ventiler for å lede væsken til avfall.
Søyle
Kolonnen er HPLC stasjonære fase. Den er ansvarlig for å skille de enkelte molekyler i hver prøve før de er karakterisert ved detektoren. Kolonnen blir pakket med materiale som er utformet for selektivt samvirke med spesifikke molekyler. Retensjonstiden av molekyler av den stasjonære fase er avhengig av deres affinitet for den stasjonære sammenlignet med de mobile faser. Avhengig av analysen, kan revers-fase eller normal fase-kolonner anvendes.
Detector
Detektoren er den komponenten som identifiserer absorpsjon eller fluorescens profilen til hvert molekyl som strømmer gjennom systemet. Avhengig av molekylene som blir analysert, ultrafiolett, synlig eller fluorescens detektorer kan brukes. Detekteringsbølgelengden er forhåndsinnstilt før analyse, og de resulterende data brukes til å lage en spektral profil for hvert kjemikalie detektert.
kromatogram
Kromatogrammet er en grafisk representasjon av data som samles inn ved hjelp av detektoren. Y-aksen viser absorpsjonsevne eller utslipp, mens X-aksen viser retensjonstid. "Topper" på kromatogrammet representerer ett eller flere molekyler i prøven. Eksempel informasjon blir identifisert basert på de travleste områdene og retensjonstider.