GSH Analyse Protokoller

Glutation eller GSH er et protein som finnes i både planter og dyr. De arbeider for å hjelpe enzymreaksjoner i avgiftning av miljøgifter. I tillegg har det letter aminosyre transport i cellene og bidrar til å opprettholde protein sulfhydryl reduksjonsreaksjoner. GSH Analyse protokoller bruke GSH buffere, standarder, underlaget, enzymer og reagenser. Ved å følge den spesifikke prosedyren er relevant for resultatet av analysen.

Enzymatisk Gjenvinning Metode

Den enzymatiske resirkulering metode, for GSH, anvender glutation reduktase å kvantifisere GSH. Denne protokollen er spesielt for plasma, vev eller dyrkede celleprøver. Tilsett reagens DTNB (5-5'-ditio-bis-2-nitrobenzosyre) til GSH. Sulfhydrylgruppen i GSH reagerer med reagensen og frembringer en gul syre kalt 5-tio-2-nitrobenzosyre (TNB). Legg glutation reduktase til syren og GSH blanding for å resirkulere GSH og produsere mer syre. I denne prosedyren, er frekvensen av syreproduksjonen er proporsjonal med resirkulering omsetning av GSH; Derfor måle absorbansen til TNB syre ved anvendelse av et spektrofotometer. Absorbansen gir et estimat av den virkelige mengden av GSH i prøven.

Levercelle Glutathione Assay

Denne protokollen analyserer mengden av GSH i human hepatokarsinom (leverkreft) celler. For å gjennomføre denne prosedyren, bruker kolo metode for GSH vilje til å redusere og oksidere GSH. Redusere GSH ved hjelp av 5-5'-ditiobis (2-nitrobenzosyre eller DTNB) for å danne

farget produkt 2-nitro-5-tiobenzo-syre og oksydert glutation (GSSG). Bruk glutation reduktase å redusere GSSG å danne GSH igjen. For å måle mengden av GSH i levercellene, lese prøven ved 415 absorbans kinetisk på en mikroplateleser.

Cell apoptose

I denne protokollen blir GSH brukes til å detektere celle apoptose (død) gjennom måling av reduksjonen i redusert GSH. En reduksjon i konsentrasjonen av cellulær GSH er en indikator på celledød. Flekk eksempel celler med ikke-fluorescerende thiolite grønt. Den thiolite grønne akkumuleres i cytosol (celle plasma) og mitokondrier (drivkraft) i cellen. Bruke et flowcytometer ved 490/520 nm for å visualisere mengden av GSH i cellene.

Total konsentrasjon av GSH i dyre- og plante Samples

Måle konsentrasjonen av den totale GSH i både reduserte og oksyderte formen i forskjellige dyre- og planteprøver. Legge til den generelle thiolreagens, 5-5'-ditiobis [2-nitrobenzosyre]. Tiolen reagens reagerer med GSH under dannelse av 412 nm kromofor, 5-thionitrobenzoic syre (TNB) og GS-TNB. Legg glutation reduktase og beta-nikotinamid-adenin-dinukleotid-fosfat (NADPH) for å redusere GS-TNB. Glutation vil også gi ut en andre TMB molekyl og resirkulere GSH. I tillegg er en hvilken som helst oksidert GSH (GSSG) som er tilstede i blandingen fromed fra disulfidet reaksjonen også redusert til GSH. Bruke en mikroplateleser ved 405 nanometer for å lese absorbansen nivå og indikerer den totale konsentrasjon av GSH.